VAX2表达与临床相关性分析
评估VAX2在CRC组织和细胞系中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。
通过TCGA数据库分析VAX2表达和生存预后；使用Western blot和IHC检测CRC细胞系及临床样本（13对和TMA）中VAX2表达；统计分析表达与肿瘤分期和预后的相关性。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
VAX2-SERPINE1轴通过WNT/β-catenin信号调控结直肠癌细胞增殖和凋亡
The VAX2-SERPINE1 axis modulates colorectal cancer cell proliferation and apoptosis through WNT/beta-catenin signaling.
实验完整度
高包含体外细胞功能实验（增殖、凋亡、迁移）、机制验证（RNA-seq、ChIP、双荧光素酶、Co-IP等）及体内皮下移植瘤模型，证据层级独立且充分。
主要模型
人结直肠癌细胞系（HCT116、SW480、LoVo等） 人胃癌细胞系（AGS、HGC-27） BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型 结直肠癌患者组织样本（71对新鲜样本、组织芯片）
重点核对
VAX2敲低或过表达的效率验证（mRNA<50%或>200%相对对照） 动物实验分组：BALB/c裸鼠随机分为5组，每组6只 Tiplaxtinin给药剂量：5mg/kg，每日口服，持续3周 细胞接种量：5×10^6细胞皮下注射 统计分析：所有实验重复三次，使用Student's t-test或ANOVA
摘要
转录因子（TFs）参与结直肠癌（CRC）。然而，VAX2在CRC发展中的功能和机制仍鲜为人知。在本研究中，我们观察到转录因子VAX2在CRC内部样本集、外部组织芯片和细胞系中频繁上调。高VAX2表达与肿瘤的侵袭性和AJCC分期显著相关。此外，VAX2表达的降低功能性地抑制CRC细胞增殖并促进凋亡，反之亦然。机制上，VAX2通过促进β-catenin的核积累参与WNT/β-catenin信号通路，并且VAX2特异性结合SERPINE1启动子并触发其转录。SERPINE1过表达显著逆转了VAX2敲低诱导的恶性行为抑制和β-catenin核积累。在体内，SERPINE1的敲低或其抑制剂Tiplaxtinin的口服给药均一致地减弱了VAX2增强的增殖能力。与TCGA-CRC分析一致，在新鲜CRC样本中可检测到VAX2与SERPINE1之间的正相关。因此，VAX2-SERPINE1轴参与CRC进展，并可作为抗CRC的潜在靶点。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- VAX2在结直肠癌中的表达水平、临床相关性及其促进肿瘤进展的分子机制是什么？
- 核心机制
- VAX2通过转录激活SERPINE1，促进β-catenin的核积累，从而激活WNT/β-catenin信号通路，进而促进CRC细胞增殖并抑制凋亡。
- 主要证据
- 通过TCGA和TMA分析发现VAX2上调且与恶性特征相关；细胞实验显示VAX2影响增殖和凋亡；机制实验（RNA-seq、ChIP、双荧光素酶）验证VAX2直接结合SERPINE1启动子并激活转录；体内实验证实SERPINE1敲低或Tiplaxtinin处理可减弱VAX2诱导的肿瘤生长。
- 研究意义
- 本研究揭示了VAX2-SERPINE1轴在CRC进展中的新机制，并提示VAX2可作为CRC的潜在预后生物标志物和治疗靶点。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
VAX2对CRC细胞恶性行为的体外功能验证
明确VAX2对CRC细胞增殖、凋亡和迁移的影响。
在LoVo细胞中过表达VAX2，在HCT116和SW480细胞中敲低VAX2，通过克隆形成、EdU、流式凋亡和Transwell实验检测细胞功能变化。
VAX2参与WNT/β-catenin信号通路机制研究
探究VAX2调控WNT/β-catenin信号通路的机制。
对VAX2敲低细胞进行RNA-seq，KEGG和GSEA富集分析；检测β-catenin核积累、与LEF1结合、下游靶基因表达及TOP/FOPflash报告基因活性。
VAX2转录激活SERPINE1的机制验证
验证VAX2是否直接结合SERPINE1启动子并激活其转录。
RNA-seq筛选下游靶基因，ChIP验证VAX2结合SERPINE1启动子，双荧光素酶报告基因检测启动子活性及突变体影响。
SERPINE1在VAX2介导的体外表型中的挽救实验
验证SERPINE1是否是VAX2功能的关键下游介质。
在VAX2敲低细胞中过表达SERPINE1，检测增殖、凋亡、β-catenin核积累及下游靶基因表达。
体内验证SERPINE1在VAX2促进肿瘤生长中的作用
验证SERPINE1对VAX2诱导的体内肿瘤生长的影响。
使用LoVo细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型，分别进行SERPINE1敲低或口服Tiplaxtinin处理，检测肿瘤体积、重量、增殖指标（PCNA）及β-catenin核积累。
VAX2与SERPINE1在临床样本中的相关性验证
验证VAX2与SERPINE1在CRC患者中的表达相关性。
在71对CRC和正常组织中通过qRT-PCR检测VAX2和SERPINE1表达，并进行相关性和预后分析。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
评估体内效果
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | RPMI-1640培养基 | Procell | -- |
| DMEM培养基 | Procell | -- | |
| 胎牛血清 | Biological Industries | -- | |
| 青霉素-链霉素 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 替普拉替宁 | MedChemExpress | S7922 | |
| RNA提取 | TRIzol试剂 | Accurate Biology | AG21101 |
| RT-qPCR | SYBR Green PCR试剂盒 | Accurate Biology | AG11702 |
| 逆转录试剂盒 | Accurate Biology | AG11705 | |
| 蛋白提取 | RIPA裂解液 | -- | -- |
| 蛋白定量 | BCA试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | 23227 |
| Western blot | 硝酸纤维素膜 | Merck Millipore | ISEQ00010 |
| 化学发光底物 | YEASEN | 36208ES76 | |
| 克隆形成 | 结晶紫 | Solarbio | G1062 |
| EdU实验 | EdU染色试剂盒 | Ribobio | C10310 |
| 凋亡检测 | Annexin V-YSFluor™ 647/PI凋亡检测试剂盒 | YeaSen | -- |
| Transwell迁移实验 | Transwell小室 | BD Biosciences | 353097 |
| 转染 | Lipofectamine 3000转染试剂 | Invitrogen Life Technologies | -- |
| 载体构建 | pcDNA3.1载体 | Kidan Biosciences | -- |
| pGL3质粒 | Kidan Biosciences | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养和转染 | 细胞系来源和培养基、FBS浓度、转染试剂及效率标准（mRNA<50%或>200%） 阅读提示：Materials and methods 中的“Cell lines, antibodies and reagents”和“Plasmid construction, siRNA and lentivirus packaging” |
| 体外功能实验 | 克隆形成实验中的细胞接种密度、培养时间（14天）；EdU实验中的EdU浓度（50 μM）和孵育时间（2小时）；凋亡检测中转染后检测时间（48小时）；Transwell实验中的细胞数、迁移时间（24-72小时） 阅读提示：Materials and methods 中的“Colony formation”、“5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU) staining assay”、“Detection of apoptotic cells by flow cytometry”、“Transwell migration assay” |
| 机制验证实验 | ChIP实验中的抗体（抗VAX2）、预测结合位点（位于启动子-1172至-1141 bp）；双荧光素酶报告基因实验中报告质粒（WT和MUT）及转染时间（48小时） 阅读提示：Materials and methods 中的“Chromatin immunoprecipitation (ChIP)”和“Dual luciferase assay” |
| 体内动物实验 | 小鼠品系（BALB/c裸鼠）、年龄（4-6周）、细胞接种量（5×10^6）、分组（5组，每组6只）、Tiplaxtinin剂量（5mg/kg）和给药方式（口服，每日，持续3周） 阅读提示：Materials and methods 中的“Animal models” |
| 临床样本分析 | 临床样本收集标准（距肿瘤边缘>5 cm）、71对样本、组织芯片（99例CRC和79例正常组织）的来源和染色条件 阅读提示：Materials and methods 中的“Clinical samples”和“Tissue microarrays (TMA) and immunohistochemistry (IHC)” |