L-龙脑通过调节MFSD2A/Cav-1信号通路重塑血脑屏障转运功能减轻缺血性卒中

目的：本研究比较L-龙脑及其主要成分（L-龙脑和L-樟脑的联合应用）对大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）模型的脑保护作用。它还基于网络药理学预测，明确了这些化合物对IS的神经保护作用与血脑屏障（BBB）之间的内在调节机制。此外，研究探讨了这些化合物与主要促进因子超家族结构域蛋白2A（MFSD2A）/小窝蛋白-1（Cav-1）信号轴之间的关系。方法：建立大鼠MCAO/R模型，评价L-龙脑（200 mg/kg）及其主要成分组合（L-龙脑和L-樟脑，6:4比例，200 mg/kg）的治疗效果。采用神经功能评分、2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色、苏木精-伊红（HE）染色和尼氏染色评价大鼠的神经损伤。应用脑血流多普勒监测脑血流变化。通过白蛋白渗漏的免疫荧光分析和透射电子显微镜（TEM）评价血脑屏障（BBB）完整性。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法确定最佳药物浓度。采用跨上皮电阻（TEER）和辣根过氧化物酶（HRP）试验确证体外BBB共培养模型成功建立。利用网络药理学预测L-龙脑主要成分（L-龙脑和L-樟脑）治疗缺血性卒中（IS）所涉及的生物学过程、分子功能和细胞组分。最后，采用免疫荧光、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot分析检测脑组织和hCMEC/D3细胞中主要促进因子超家族结构域蛋白2A（MFSD2A）、小窝蛋白-1（CAV-1）、固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）的表达。结果：网络药理学预测表明，L-龙脑及其主要成分（L-龙脑和L-樟脑）治疗IS可能涉及囊泡运输和神经保护。L-龙脑及其主要成分治疗IS显著降低神经功能评分和脑梗死面积，同时减轻病理形态学改变并增加海马尼氏小体数量。此外，它改善了脑血流，减少了白蛋白渗漏，并减少了脑内囊泡数量。共培养模型的跨上皮电阻（TEER）在共培养第五天稳定，此时共培养模型对辣根过氧化物酶（HRP）的通透性显著低于空白室。RT-qPCR和Western blot结果表明，与模型组相比，SREBP1和MFSD2A的表达显著增加，而Cav-1的表达降低。结论：L-龙脑及其主要成分组合（L-龙脑/樟脑，6:4比例）可能通过调节MFSD2A/Cav-1信号通路改善BBB转运功能，从而对大鼠IS发挥保护作用。