DACT1通过激活PI3K/AKT信号在喉鳞状细胞癌中抑制铜死亡并促进细胞恶性行为

背景：喉癌在头颈癌中死亡率最高。DACT1是喉癌中与铜死亡相关的基因，是患者预后的危险因素。本研究旨在探讨DACT1对喉鳞状细胞癌（LSCC）细胞恶性行为和铜死亡的影响。方法：采用RT-qPCR和Western blotting检测LSCC细胞中DACT1的表达。为建立铜死亡细胞模型，将TU212和TU686细胞与elesclomol（20 nM）和CuCl2（20 nM）孵育24小时。转染shRNA或pcDNA3.1载体以干扰DACT1表达。分别使用LY294002（PI3K抑制剂）和740Y-P（PI3K激动剂）沉默和过表达LSCC细胞中的PI3K信号。使用铜死亡特异性抑制剂四硫代钼酸盐抑制LSCC细胞中的铜死亡。采用CCK-8实验、集落形成实验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验评估细胞活力、增殖、迁移和侵袭。同时测量铜浓度和活性氧（ROS）水平。通过Western blotting定量铜死亡相关基因和PI3K/AKT通路相关蛋白的水平。结果：DACT1在LSCC细胞中表达上调。DACT1敲低抑制LSCC细胞的增殖、迁移和侵袭。DACT1缺失增强铜死亡，表现为细胞活力下降更明显、细胞内铜浓度和ROS水平升高、HSP70上调以及LIAS下调。值得注意的是，铜死亡抑制剂四硫代钼酸盐处理逆转了DACT1沉默诱导的促铜死亡效应。此外，DACT1沉默使PI3K/AKT信号失活，表现为p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比率降低。相反，DACT1过表达激活PI3K/AKT通路，而LY294002可消除这一效应。此外，LY294002逆转了DACT1对LSCC细胞恶性行为的促进作用及其对铜死亡的抑制作用。相反，740Y-P激活PI3K信号逆转了DACT1缺失引起的铜死亡增强。结论：DACT1通过激活PI3K/AKT信号促进LSCC细胞的恶性行为并抑制铜死亡。