建立DSS诱导的UC小鼠模型并评估CUR治疗效果
验证CUR对DSS诱导的结肠炎的治疗作用，并评估其临床和组织病理学改善。
C57BL/6小鼠给予2.5% DSS饮水诱导结肠炎，CUR通过灌胃给药（100 mg/kg/day），记录体重、DAI、生存率、结肠长度和重量、脾脏重量和指数，以及组织病理学评分。
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姜黄素调节TIGIT/神经毡蛋白-1以调节溃疡性结肠炎中的T细胞免疫稳态
Curcumin Modulates TIGIT/Neuropilin-1 to Regulate T-Cell Immune Homeostasis in Ulcerative Colitis.
实验完整度
高包含DSS小鼠模型、Jurkat细胞体外实验、网络药理学、分子对接、分子动力学模拟、免疫荧光、Western blot等多层级验证，并有功能验证和机制验证。
主要模型
DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型 Jurkat T细胞系（Clone E6-1）
重点核对
DSS浓度2.5%（w/v）诱导，周期21天（7天DSS+7天水+7天DSS） CUR给药方案：100 mg/kg/day灌胃，从第7天至第21天 Jurkat细胞刺激：PMA（50 ng/mL）和离子霉素（500 ng/mL）处理24小时 CUR处理浓度：1.5、3、6 μM 动物分组：Ctrl、Ctrl+CUR、DSS、DSS+CUR，每组10只
摘要
(1) 背景：溃疡性结肠炎（UC）是一种持续性的肠道炎症性疾病，其特征是T细胞介导的免疫反应失调。姜黄素（CUR）是一种常见的食品添加剂和保健品，具有抗炎和免疫调节特性。然而，其治疗作用的分子机制尚未完全阐明。本研究旨在探讨CUR在UC中的治疗机制，重点关注其通过调节TIGIT和神经毡蛋白-1（NRP1）来恢复T细胞稳态的作用。(2) 方法：我们采用DSS诱导的小鼠结肠炎模型，结合网络药理学、分子对接、蛋白质-蛋白质相互作用对接、分子动力学模拟以及Jurkat T细胞的体外实验。(3) 结果：CUR显著改善了DSS处理小鼠的临床表现和组织病理学，恢复了T细胞和记忆T细胞亚群的平衡。计算预测和实验验证表明，CUR下调了发炎结肠组织中TIGIT和NRP1的表达，并直接抑制了体外活化T细胞中的表达。(4) 结论：本研究揭示了这种天然化合物的新型免疫调节机制。这些发现表明，CUR通过调节TIGIT/NRP1来抑制过度的T细胞活化，并恢复UC中的免疫稳态。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 姜黄素是否通过调节TIGIT/NRP1轴来恢复T细胞免疫稳态，从而缓解溃疡性结肠炎？
- 核心机制
- CUR通过下调TIGIT和NRP1的表达，抑制T细胞过度活化，恢复T细胞亚群（包括记忆T细胞）的平衡，从而减轻结肠炎症。
- 主要证据
- 在DSS诱导的结肠炎小鼠中，CUR减轻了体重下降、DAI、结肠缩短和组织损伤；恢复了CD4+ T细胞、Treg、Th1、Th17及记忆T细胞亚群的平衡；RNA和蛋白水平检测显示CUR下调结肠组织中TIGIT、NRP1及其配体/共受体（CD155、NRP2）的表达。在体外，CUR抑制Jurkat T细胞活化标志物（IL-2、CD69、CD25、NFATc1）和促炎细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-17A）的表达，并下调TIGIT和NRP1的mRNA和蛋白水平。功能实验显示，抑制TIGIT/NRP1可阻断CUR的部分抗炎作用。
- 研究意义
- 该研究首次阐明CUR通过靶向TIGIT/NRP1免疫检查点轴恢复T细胞免疫平衡的机制，为基于CUR的UC治疗策略（特别是与TIGIT/NRP1抑制剂联合的方案）提供了理论基础，也为其他慢性自身免疫或炎症性疾病的治疗提供了新视角。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
流式细胞术分析T细胞亚群
检测CUR对T细胞和记忆T细胞亚群平衡的影响。
从小鼠脾脏制备单细胞悬液，通过流式细胞术检测CD4+ T细胞亚群（Treg、Th1、Th17）及其记忆亚群（Tcm、Tem），并分析TIGIT在不同亚群的表达。
网络药理学、分子对接和分子动力学模拟预测CUR靶点
预测CUR治疗UC的可能分子靶点，特别是TIGIT和NRP1的相互作用。
利用PubChem、SwissTargetPrediction、SEA、GeneCards、OMIM等数据库预测CUR和UC相关靶点，构建PPI网络、GO/KEGG富集分析、分子对接（AutoDock Vina）和分子动力学模拟（GROMACS）、蛋白质-蛋白质对接（HDOCK）。
检测CUR对结肠组织中TIGIT/NRP1表达的影响
验证CUR在体内对TIGIT/NRP1基因和蛋白表达的调节作用。
RT-qPCR检测结肠组织中TIGIT、CD155、NRP1、NRP2、IL-10、TGF-β1的mRNA表达；Western blot检测TIGIT和NRP1蛋白水平；免疫荧光观察其定位和表达。
体外验证CUR对Jurkat T细胞活化和TIGIT/NRP1表达的影响
验证CUR直接抑制T细胞活化并下调TIGIT/NRP1表达。
Jurkat细胞经PMA/离子霉素刺激，并用不同浓度CUR（1.5、3、6 μM）处理，检测活化标志物（IL-2、CD69、CD25、NFATc1）和促炎因子（IL-6、TNF-α、IL-17A）的mRNA表达，以及TIGIT和NRP1的mRNA和蛋白表达。
使用TIGIT/NRP1抑制剂进行功能验证
确定CUR的抗炎作用是否依赖于TIGIT/NRP1信号通路。
Jurkat细胞预先用TIGIT抑制剂（Tiragolumab）或NRP1抑制剂（Vesencumab）处理1小时，然后与CUR（3 μM）共处理，检测活化标志物和促炎因子的mRNA水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型诱导 | 葡聚糖硫酸钠 | MP Biomedicals | -- |
| 药物处理 | 姜黄素 | MedChemExpress | -- |
| 细胞刺激 | 佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯 | MedChemExpress | -- |
| 离子霉素钙盐 | Solarbio | -- | |
| 药物处理 | 羧甲基纤维素钠 | Solarbio | -- |
| 细胞功能验证 | Tiragolumab | Aladdin | -- |
| Vesencumab | Aladdin | -- | |
| 粪便隐血检测 | 粪便隐血检测试剂盒 | Zhuhai Baso Biotechnology | -- |
| 细胞因子检测 | ELISA试剂盒（IL-10、TGF-β1、IL-6、IL-17A、TNF-α） | Thermo Fisher | -- |
| RNA提取 | 快速组织/细胞RNA提取试剂盒 | Aidlab | -- |
| 反转录 | TRUEscript RT MasterMix（一步法去除gDNA）反转录试剂盒 | Aidlab | -- |
| qPCR | 2× Dual Sybr Green qPCR预混液（通用ROX） | Aidlab | -- |
| 流式细胞术 | BD Pharmingen™白细胞活化鸡尾酒（含GolgiPlug） | BD Biosciences | -- |
| BD Cytofix/Cytoperm™固定/破膜试剂盒 | BD Biosciences | -- | |
| BD Pharmingen™转录因子缓冲液套装 | BD Biosciences | -- | |
| AF647荧光标记大鼠抗小鼠CCR7抗体 | BD Biosciences | -- | |
| V450荧光标记大鼠抗小鼠CCR6抗体 | BD Biosciences | -- | |
| V500和APC荧光标记大鼠抗小鼠CD4抗体 | BD Biosciences | -- | |
| PE荧光标记大鼠抗小鼠CXCR3抗体 | BD Biosciences | -- | |
| PE-Cy7荧光标记大鼠抗小鼠IFN-γ抗体 | BD Biosciences | -- | |
| PE荧光标记大鼠抗小鼠IL-17A抗体 | BD Biosciences | -- | |
| V450和PE荧光标记大鼠抗小鼠Foxp3抗体 | BD Biosciences | -- | |
| Western blot | 抗TIGIT抗体 | Proteintech | 83545-1-RR |
| 抗神经毡蛋白-1抗体 | Proteintech | 84429-5-RR | |
| β-actin抗体 | Cell Signaling Technology | 4970S | |
| HRP标记的抗兔IgG二抗 | Cell Signaling Technology | 7074S | |
| Western blot封闭液 | Beyotime | P0023B-500mL | |
| BioECL超敏化学发光检测试剂盒 | Biochem | BKM-EL-200 | |
| 免疫荧光 | FITC标记的山羊抗兔IgG（H+L）二抗 | Proteintech | SA00003-2 |
| DAPI染色液 | LEAGENE | 0305A25 | |
| 抗荧光淬灭封片剂 | Boster | AR1109 | |
| 蛋白质提取 | RIPA裂解液（强） | Biochem | -- |
| 蛋白质定量 | 超快速5分钟BCA蛋白定量试剂盒 | Suzhou Probelives Technology | P30008 |
| 仪器 | FACSCanto II流式细胞仪 | BD Biosciences | -- |
| RT-qPCR | CFX96 Touch实时荧光定量PCR检测系统 | Bio-Rad | -- |
| Western blot | ChemiDoc MP成像系统 | Bio-Rad | -- |
| 组织病理学 | Leica显微镜 | Leica | -- |
| 免疫荧光 | Leica荧光显微镜系统（DM2000LED） | Leica | -- |
| ELISA检测 | Varioskan多功能酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 分子对接 | AutoDock Vina | -- | -- |
| 分子动力学模拟 | GROMACS | -- | -- |
| 分子可视化 | PyMOL | -- | -- |
| Discovery Studio | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型与分组 | 小鼠品系（C57BL/6，雄性，7-8周龄，22±2g），DSS浓度和给药周期（2.5% w/v，重复3次），CUR剂量和给药方式（100 mg/kg/day，灌胃），分组及样本量（每组10只） 阅读提示：Methods 2.2, 2.3, 2.4；Figure 1A |
| 流式细胞术分析 | 脾脏单细胞制备，刺激条件（BD Leukocyte Activation Cocktail with GolgiPlug，37°C，5% CO2，4-6小时），抗体克隆和稀释度（1:100），门控策略（CD4+、Treg、Th1、Th17、Tcm、Tem等） 阅读提示：Methods 2.8；Figure 2和图例 |
| 体外细胞实验 | Jurkat细胞培养条件（培养基Procell CM-0129，密度≤2×10^6 cells/mL），刺激物浓度（PMA 50 ng/mL，Ionomycin 500 ng/mL，处理24小时），CUR浓度（1.5, 3, 6 μM），IC50测定（30.42 μM） 阅读提示：Methods 2.12；Figure 6A,B |
| TIGIT/NRP1功能验证 | 抑制剂浓度和处理时间（5 μg/mL，预处理1小时），CUR浓度（3 μM），分组设置，检测指标（IL-2、CD69、CD25、NFATc1、IL-6、TNF-α、IL-17A） 阅读提示：Methods 2.12；Figure 7 |
| 分子表达检测 | RT-qPCR引物序列（Table 1），内参基因（GAPDH），Western blot抗体信息（TIGIT、NRP1、β-actin），免疫荧光条件（抗体稀释度、二抗、DAPI） 阅读提示：Methods 2.14, 2.15, 2.16；Table 1；Figure 5 |
| 计算模拟 | 网络药理学数据库和参数（SwissTargetPrediction, SEA, GeneCards, OMIM），分子对接软件和参数（AutoDock Vina），分子动力学模拟参数（力场、时间、温度） 阅读提示：Methods 2.9, 2.10, 2.11；Figure 3 |