UCMSCs的分离与培养
获取用于实验的脐带间充质干细胞
从健康孕妇的足月剖宫产脐带中分离Wharton's jelly组织,采用组织块贴壁法培养,传代至P3。
Escin Preincubation Enhances the Therapeutic Effect of Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Model of Myocardial Infarction.
包含体外细胞功能实验、转录组测序、Western blot验证、PBMCs增殖实验及大鼠MI模型体内功能和组织学验证,证据层级丰富。
人脐带间充质干细胞(UCMSCs) Sprague-Dawley大鼠心肌梗死模型
七叶皂苷预处理浓度10μM,时间72h UCMSCs和E-UCMSCs细胞数量:1×10^6个,尾静脉注射 心肌梗死模型:永久结扎左前降支冠状动脉 治疗分组:MI+NS、MI+UCMSCs、MI+E-UCMSCs,n=4 检测时间点:细胞治疗后21天进行超声心动图和组织学分析
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取用于实验的脐带间充质干细胞
从健康孕妇的足月剖宫产脐带中分离Wharton's jelly组织,采用组织块贴壁法培养,传代至P3。
确定七叶皂苷的适宜浓度并评估其对UCMSCs基本特性的影响
用不同浓度七叶皂苷处理UCMSCs,CCK-8检测细胞活性;用10μM七叶皂苷处理72h后进行细胞周期分析和流式细胞术检测表面标志物。
比较E-UCMSCs与UCMSCs的基因表达差异
提取总RNA进行RNA-seq,分析差异表达基因,并进行KEGG通路富集分析。
验证RNA-seq结果中ICAM1和GATA4的蛋白表达变化
提取细胞蛋白,WB检测ICAM1和GATA4表达。
评估E-UCMSCs的免疫抑制能力是否增强
建立共培养体系,用CFSE标记PBMCs,PHA刺激,流式细胞术检测PBMCs增殖。
评估E-UCMSCs对MI大鼠心脏功能和梗死面积的影响
对大鼠永久结扎左前降支冠状动脉建立MI模型,2周后分组静脉注射NS、UCMSCs或E-UCMSCs,21天后进行心功能和组织学检测。
检测E-UCMSCs对心功能、纤维化和血管形成的影响
超声心动图检测LVEF和LVFS;Masson三色染色评估纤维化面积;CD31免疫荧光染色评估毛细血管密度。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | MSC-T4培养基 | CSTI | -- |
| UltraGRO | Helios | -- | |
| CTS TrypLE Select | Gibco | -- | |
| 药物处理 | 七叶皂苷 | MCE | -- |
| 细胞活性检测 | CCK-8试剂盒 | MCE | -- |
| 细胞周期检测 | DNA含量检测试剂盒 | Solarbio | -- |
| 流式分析 | CD44-FITC抗体 | BioLegend | B285079 |
| CD90-PE抗体 | BioLegend | 355412 | |
| CD105-APC抗体 | BioLegend | B337814 | |
| CD73-APC/Cyanine7抗体 | BioLegend | B355163 | |
| CD19-PerCP抗体 | BioLegend | B285536 | |
| CD45-FITC抗体 | BioLegend | B354432 | |
| CD34-PE抗体 | BioLegend | B320635 | |
| CD11b-APC抗体 | BioLegend | B278346 | |
| HLA-DR-APC/Cyanine7抗体 | BioLegend | B353658 | |
| RNA-seq | RNAiso Plus试剂 | Tiangen Biotech | -- |
| Western blot | RIPA裂解液 | Beyotime | -- |
| Bradford蛋白浓度测定试剂盒 | Beyotime | -- | |
| SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | Beyotime | -- | |
| 硝酸纤维素膜 | -- | -- | |
| 脱脂奶粉 | Wandashan | -- | |
| ICAM1抗体 | Beyotime | AF1774 | |
| GATA4抗体 | Abcam | ab256782 | |
| GAPDH抗体 | Affinity | AF7021 | |
| HRP标记二抗 | Abcam | ab6721 | |
| ECL底物 | MCE | -- | |
| 组织学分析 | 切片机 | Leica | -- |
| Masson三色染色液 | -- | -- | |
| Pannoramic MIDI扫描仪 | 3D HISTECH | -- | |
| 免疫荧光染色 | 柠檬酸抗原修复液 | Servicebio | G1202 |
| 牛血清白蛋白 | Servicebio | GC305010 | |
| CD31抗体 | Servicebio | GB113151 | |
| 人核抗体 | Merck | MAB1281 | |
| 二抗 | Servicebio | GB21303 | |
| DAPI染色液 | Servicebio | G1012 | |
| PBMCs增殖实验 | CFSE | TargetMol | 150347-59-4 |
| 外周血单个核细胞 | Procell | CP-H158 | |
| 植物血凝素 | YEASEN | 40110ES08 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养与预处理 | UCMSCs来源、培养条件、七叶皂苷浓度及处理时间 阅读提示:Methods 2.1和2.2 |
| RNA-seq | 细胞处理条件、RNA提取方法、测序平台、差异表达基因阈值 阅读提示:Methods 2.5 |
| Western blot | 蛋白提取、抗体信息、上样量 阅读提示:Methods 2.6 |
| 动物模型 | 动物品系、年龄、MI手术方法、细胞移植剂量和途径 阅读提示:Methods 2.7 |
| 心功能与组织学评估 | 超声心动图参数、Masson染色和免疫荧光染色的具体步骤 阅读提示:Methods 2.8和2.9 |