建立LPS诱导的抑郁样小鼠模型
验证LPS能否诱导小鼠表现出抑郁样行为和神经炎症，并检测p120表达变化。
成年雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射LPS（2 mg/kg/day）或PBS连续3天，通过行为学测试评估抑郁样行为，并检测海马p120、NF-κB、pNF-κB、IL-1β的表达及血浆IL-1β。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
小鼠海马中p120连环蛋白的下调促进抑郁样表型的发展
Downregulation of p120 catenin in the mouse hippocampus contributes to the development of depression-like phenotypes.
实验完整度
高包含体内（小鼠LPS模型、海马p120敲低）和体外（PC-12细胞）两个层级的功能与机制验证，并涉及行为学、Western blot、qRT-PCR、ELISA、免疫荧光等。
主要模型
C57BL/6J小鼠（LPS诱导的抑郁样模型） PC-12细胞
重点核对
LPS给药剂量及方式：2 mg/kg/day，腹腔注射，连续3天 p120敲低载体：AAV-shRNA-p120，立体定位注射至海马CA3区，注射剂量1×10^12 genome copies/mL PC-12细胞LPS处理浓度与时间：1000 ng/mL，6小时 行为学测试时间：LPS最后一次注射后24小时；病毒注射后3周
摘要
背景：重度抑郁症是一种高发的精神疾病，也是全球致残的主要原因之一。神经炎症与MDD的病理生理学密切相关，提示神经炎症信号调节因子可能是可行的治疗靶点。CTNND1基因编码p120（或连环蛋白δ）的armadillo蛋白家族成员，在细胞间粘附和信号转导中发挥作用，包括在免疫细胞中，提示其具有免疫调节活性。结果：我们报告全身注射细菌毒素脂多糖（LPS）诱导小鼠抑郁样行为，同时激活神经炎症NF-κB信号通路，上调白细胞介素-1β（IL-1β）表达，并降低海马中p120表达。此外，shRNA介导的海马p120敲低也激活了NF-κB信号通路，增强了IL-1β表达，并诱导了相同的抑郁样行为。类似地，LPS处理和p120敲低在PC12细胞中也上调了pNF-κB和IL-1β水平。结论：这些发现表明p120可能通过抑制海马中的促炎NF-κB-IL-1β信号来预防抑郁症状的发展或表达。靶向p120可能是治疗MDD的可行策略。图形摘要：p120的敲低作为通过NF-κB信号的神经炎症负调节因子。补充信息：在线版本包含补充材料，可在10.1186/s12993-025-00305-x获取。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- p120在LPS诱导的神经炎症和抑郁样行为中的作用及其潜在机制。
- 核心机制
- p120通过抑制NF-κB信号通路和IL-1β表达，负调控海马神经炎症，从而预防抑郁样行为。
- 主要证据
- LPS和p120敲低均降低p120并升高pNF-κB和IL-1β，诱导抑郁样行为；PC-12细胞中亦证实。
- 研究意义
- 靶向p120可能成为治疗MDD的可行策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
海马p120敲低验证其功能
检验海马特异性p120敲低是否能模拟LPS的效应，从而证明p120在抑郁样行为中的直接作用。
通过立体定位注射AAV-shRNA-p120或对照载体至海马CA3区，3周后进行行为学测试，并检测p120、pNF-κB、IL-1β的表达。
PC-12细胞模型验证
在体外细胞模型中验证LPS和p120敲低对NF-κB信号通路的影响，排除体内复杂因素的干扰。
PC-12细胞用LPS（1000 ng/mL）处理6小时，或用shRNA-p120慢病毒感染敲低p120，检测p120、pNF-κB、IL-1β的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| LPS处理 | 脂多糖 | Servicebio | GC205009 |
| LPS溶解 | 1×磷酸盐缓冲液 | Servicebio | G4202 |
| 病毒注射 | pAAV-mCherry | OBiO Technology | -- |
| pAAV-mCherry-shRNA | OBiO Technology | -- | |
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | ELK Biotechnology | ELK1271 |
| 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | VARIOSKAN | |
| 细胞培养 | PC-12细胞 | Procell | CL-0481 |
| PC-12细胞培养基 | Procell | CM-0481 | |
| 脂多糖 | Servicebio | GC205009 | |
| qRT-PCR | HiPure通用RNA小提试剂盒 | Tiangen | DP451 |
| NovoScript Plus一步法cDNA合成预混液 | Novoprotein | E047-01B | |
| PowerUp™ SYBR™ Green 预混液 | Thermo Fisher Scientific | A25742 | |
| 7500实时荧光定量PCR系统 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
| SDS-PAGE凝胶 | Epizyme Biotech | PG212 | |
| PVDF膜 | Merck Millipore | IPFL00010 | |
| 无蛋白快速封闭液 | Servicebio | G2052 | |
| 抗GAPDH抗体 | Proteintech | 60004-1-Ig | |
| 抗CTNND1抗体 | Proteintech | 12180-1-AP | |
| 抗NF-κB抗体 | Servicebio | GB11997-100 | |
| 抗磷酸化NF-κB抗体 | Servicebio | GB113882-100 | |
| 抗IL-1β抗体 | Immunoway | YM4682 | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG | Proteintech | SA00001-2 | |
| HRP标记的山羊抗小鼠IgG | Proteintech | SA00001-1 | |
| 增强化学发光液 | Merck Millipore | WBKLS0500 | |
| AI600超灵敏多功能成像系统 | GE | -- | |
| 免疫荧光 | 冷冻切片机 | Leica | CM1950 |
| 免疫染色一抗稀释液 | Beyotime | P0103 | |
| 抗NF-κB抗体 | Servicebio | GB11997-100 | |
| FITC标记的山羊抗小鼠IgG(H+L) | Beyotime | A0568 | |
| Cy3标记的山羊抗兔IgG(H+L) | Beyotime | A0516 | |
| Cy3标记的山羊抗小鼠IgG(H+L) | Beyotime | A0521 | |
| Alexa Fluor 647标记的山羊抗兔IgG(H+L) | Beyotime | A0468 | |
| 共聚焦显微镜 | Leica | Stellaris5SR | |
| 行为学分析 | SMART软件 | Panlab | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| LPS小鼠模型 | LPS给药剂量、给药方式、给药天数；行为学测试时间点；动物品系、性别、周龄 阅读提示：Methods: LPS treatment, Animals |
| 海马p120敲低 | 病毒载体类型、注射位点、注射体积、病毒滴度、行为学测试时间 阅读提示：Methods: Stereotaxic injection of vectors into the CA3 region of mouse hippocampus |
| PC-12细胞模型 | 细胞培养条件、LPS处理浓度和时间、慢病毒感染滴度和时间 阅读提示：Methods: Cell culture and treatment |
| 分子检测 | Western blot抗体信息、qRT-PCR引物序列、ELISA试剂盒 阅读提示：Methods: Western blot assays, qRT-PCR, ELISA |