生物信息学鉴定关键基因
识别与动脉粥样硬化泡沫巨噬细胞相关的差异表达基因，并筛选核心基因。
对GSE159677（单细胞）、GSE9874（泡沫细胞和基线巨噬细胞）、GSE100927（动脉粥样硬化病变和正常对照）三个数据集进行分析，鉴定DEGs并取交集，得到FHL1、LILRB2和SERPINA1，重点关注LILRB2。
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白细胞免疫球蛋白样受体B2通过PI3K-AKT信号通路调节泡沫巨噬细胞中巨噬细胞胞外诱捕网的形成从而影响动脉粥样硬化的进展
Leukocyte immunoglobulin-like receptor B2 regulates atherosclerosis progression by modulating macrophage extracellular trap formation in foam macrophages through the PI3K-AKT signaling pathway.
实验完整度
高包含多层级验证：生物信息学分析鉴定DEGs，细胞实验（THP-1来源泡沫巨噬细胞）验证MET形成及LILRB2功能，大鼠AS模型体内验证，以及患者组织样本检测。
主要模型
THP-1细胞来源的泡沫巨噬细胞 SD大鼠动脉粥样硬化模型 人动脉粥样硬化组织样本
重点核对
LILRB2在泡沫巨噬细胞中的表达水平（qRT-PCR和Western blot验证） ox-LDL（50 μg/mL）和TNF-α（50 ng/mL）处理浓度及诱导时间 LILRB2敲低效率（shRNA序列及验证） PI3K激动剂Y-P 740的处理及其对PI3K/AKT信号和MET形成的影响 大鼠AS模型分组（正常组 vs 高脂饮食组）及LILRB2高低表达分组
摘要
本研究旨在探讨白细胞免疫球蛋白样受体B2（LILRB2）在动脉粥样硬化（AS）中泡沫巨噬细胞形成巨噬细胞胞外诱捕网（MET）中的调节作用。对三个数据集进行了生物信息学分析以鉴定差异表达基因（DEGs）。对AS患者的动脉粥样硬化病变进行了苏木精-伊红和油红O染色。在病变中测量了脂质调节相关蛋白和炎症因子的水平。在氧化低密度脂蛋白处理的泡沫巨噬细胞中用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导MET形成。建立LILRB2敲低细胞以评估LILRB2在MET形成中的作用。在大鼠AS模型中，根据LILRB2表达分组，测量了PI3K/AKT信号通路相关分子和MET的水平。LILRB2是AS中泡沫巨噬细胞的一个关键DEG。动脉粥样硬化组织表现出脂质积累和MET水平增加，以及脂质相关和炎症因子的失调。TNF-α处理促进MET形成和LILRB2表达。Y-P 740处理减轻了LILRB2敲低诱导的PI3K/AKT信号和MET形成的抑制。LILRB2通过PI3K/AKT通路促进泡沫巨噬细胞中MET形成，从而介导AS的发病机制。靶向LILRB2及其相关信号通路可能是AS的一种新的治疗策略。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- LILRB2是否通过PI3K-AKT信号通路调节泡沫巨噬细胞中巨噬细胞胞外诱捕网（MET）的形成，进而影响动脉粥样硬化（AS）的进展？
- 核心机制
- LILRB2通过激活PI3K/AKT信号通路促进泡沫巨噬细胞中MET的形成，从而介导AS的发病机制。
- 主要证据
- 生物信息学分析显示LILRB2为关键DEG；细胞实验中，LILRB2敲低抑制PI3K/AKT磷酸化及MET形成，Y-P 740可逆转该效应；大鼠AS模型中高LILRB2表达组的PI3K/AKT信号活化和MET形成增强。
- 研究意义
- 靶向LILRB2及其相关信号通路可能是AS的一种潜在的新型治疗策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
患者动脉组织病理学分析
验证AS患者动脉组织中LILRB2表达、脂质积累和炎症因子水平。
对正常（n=2）和AS（n=5）动脉组织进行H&E染色、油红O染色、Western blot检测LDL-R、SREBP-1C、ABCA1、ABCG1、IL-6、IL-8、TNF-α和LILRB2表达。
体外诱导泡沫巨噬细胞和MET形成
建立泡沫巨噬细胞模型，并诱导MET形成以模拟AS中泡沫巨噬细胞的状态。
THP-1细胞经PMA诱导分化为巨噬细胞，再用ox-LDL处理和TNF-α刺激，通过油红O染色验证泡沫细胞形成，并通过SYTOX Green染色和MPO-DNA ELISA检测MET形成。
LILRB2功能缺失实验
验证LILRB2对MET形成和PI3K/AKT信号通路的调控作用。
构建LILRB2敲低的THP-1细胞（使用shRNA），用ox-LDL和TNF-α处理后，检测PI3K/AKT磷酸化水平、MPO-DNA复合物和MET形成；部分细胞用PI3K激动剂Y-P 740处理以观察逆转效果。
大鼠AS模型体内验证
在体内验证LILRB2表达与MET形成及PI3K/AKT信号通路激活的关联。
建立SD大鼠AS模型（高脂西方饮食20周），检测动脉组织病理、LILRB2表达、PI3K/AKT磷酸化水平及MET形成（CD68、CitH3、MPO免疫荧光），并根据LILRB2表达分为高低组进行比较。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | THP-1细胞系 | Procell | CL-0233 |
| 1640培养基 | GENOM | GNM31800 | |
| 青链霉素溶液 | GENOM | GNM15140-1 | |
| 组织染色 | 伊红染料 | Servicebio | G1002 |
| 油红O溶液 | Servicebio | G1015 | |
| Western blot | 细胞裂解液 | Beyotime | P0013 |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Beyotime | P0010 | |
| 抗LDL-R抗体 | Abcam | ab52818 | |
| 抗SREBP-1C抗体 | Proteintech | 14088-1-AP | |
| 抗ABCA1抗体 | Proteintech | 26564-1-AP | |
| 抗ABCG1抗体 | Proteintech | 13578-1-AP | |
| 抗IL-6抗体 | Proteintech | 21865-1-AP | |
| 抗IL-8抗体 | Proteintech | 27095-1-AP | |
| 抗TNF-α抗体 | Affinity | AF7014 | |
| 抗LILRB2抗体 | Proteintech | 14154-1-AP | |
| 抗磷酸化PI3K抗体 | CST | 17366 | |
| 抗PI3K抗体 | CST | 4292 | |
| 抗磷酸化AKT抗体 | CST | -- | |
| 抗AKT抗体 | CST | 9272 | |
| 抗GAPDH抗体 | Abways | AB0037 | |
| HRP标记的山羊抗小鼠抗体 | Beyotime | A0216 | |
| HRP标记的山羊抗兔抗体 | Beyotime | A0208 | |
| 免疫荧光 | 抗CD68抗体 | Affinity | DF7518 |
| AF488标记的山羊抗兔二抗 | Beyotime | A0423 | |
| MET检测 | SYTOX Green | -- | -- |
| Hoechst 33342 | -- | -- | |
| 抗CitH3抗体 | Abcam | ab281584 | |
| ELISA | MPO-DNA复合物ELISA试剂盒 | mlbio | ml060524 |
| qRT-PCR | Trizol试剂 | -- | -- |
| HiScript III 一步法RT SuperMix（qPCR专用） | Vazyme | R333-01 | |
| ChamQ通用SYBR qPCR预混液 | Vazyme | Q711-02 | |
| LILRB2敲低 | 慢病毒载体JS040 | -- | -- |
| 聚凝胺 | -- | -- | |
| 嘌呤霉素 | -- | -- | |
| 动物实验 | 高脂西方饮食 | Research Diets | D12079B |
| 药物处理 | Y-P 740 | -- | -- |
| 细胞培养诱导 | 佛波醇12-豆蔻酸酯13-乙酸酯 | -- | -- |
| 氧化低密度脂蛋白 | -- | -- | |
| 肿瘤坏死因子-α | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 生物信息学分析 | 数据集来源（GSE159677、GSE9874、GSE100927），样本分组和筛选标准（调整p < 0.05，|log2FC| > 0.32） 阅读提示：Methods 2.1-2.4 |
| 患者组织分析 | 动脉组织来源（正常组n=2，AS组n=5），患者性别、年龄、组织来源 阅读提示：Methods 2.5-2.6，Table 1 |
| 细胞实验 | THP-1细胞系来源和培养条件，PMA浓度和时间，ox-LDL浓度（50 μg/mL），TNF-α浓度（50 ng/mL） 阅读提示：Methods 2.7 |
| MET诱导和检测 | SYTOX Green浓度（200 nM），Hoechst 33342浓度（10 μg/mL），MPO-DNA ELISA操作步骤 阅读提示：Methods 2.10-2.11 |
| LILRB2敲低 | shRNA序列，慢病毒感染MOI=50，polybrene浓度（8 μg/mL），嘌呤霉素浓度（2 μg/mL），稳定转染筛选时间 阅读提示：Methods 2.13 |
| 动物实验 | 大鼠品系、性别、年龄、体重，高脂饮食类型和持续时间（20周），分组（正常组n=6，AS组n=14） 阅读提示：Methods 2.14 |
| Western blot | 一抗稀释比例（如LILRB2 1:1000，p-PI3K 1:1000等），二抗稀释比例，内参GAPDH（1:5000） 阅读提示：Methods 2.9 |