YXT成分分析
鉴定YXT的入血成分,明确其物质基础。
采用UHPLC-QE-MS技术对YXT样品和含药血清进行分析,鉴定出1049种入血成分。
Yixintai treats chronic heart failure in rats by regulating gut microbiota and bile acid.
包含体外细胞实验(H9c2细胞LPS损伤模型)、体内动物模型(大鼠LAD结扎CHF模型),并进行功能验证(心功能、炎症因子)和机制验证(TGR5表达、胆汁酸代谢)。
H9c2大鼠心肌细胞系 左前降支冠状动脉结扎致慢性心力衰竭大鼠模型
大鼠CHF模型采用左前降支冠状动脉结扎并联合饮食限制,4周后通过超声确认射血分数约50% YXT剂量分组:低剂量1.4 g/kg、中剂量2.8 g/kg、高剂量5.6 g/kg,灌胃给药4周 H9c2细胞LPS损伤模型:LPS浓度1 μg/L,处理12小时,随后药物处理24小时 血清药物制备:大鼠灌胃YXT 5.6 g/kg/天,连续10天,采血后56℃灭活30分钟
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
鉴定YXT的入血成分,明确其物质基础。
采用UHPLC-QE-MS技术对YXT样品和含药血清进行分析,鉴定出1049种入血成分。
建立慢性心力衰竭大鼠模型,评估YXT的治疗效果。
通过结扎左前降支冠状动脉并饮食限制建立CHF模型,随机分为Sham、Model、YXT低、中、高剂量组和TMZ阳性对照组,治疗4周后评估心功能、病理变化及炎症因子水平。
评估YXT对CHF大鼠肠道菌群多样性和组成的影响。
收集粪便样本,提取DNA,进行16S rRNA基因测序,分析不同分类水平的菌群丰度及多样性。
评估YXT对CHF大鼠血清胆汁酸水平的影响及其与菌群的关联。
采用UHPLC-MS/MS检测血清中多种胆汁酸浓度,并进行PCA和相关性分析。
验证YXT是否通过调节TGR5表达和抑制炎症反应发挥心脏保护作用。
采用RT-qPCR和Western blot检测心肌组织中TGR5 mRNA和蛋白表达,ELISA检测血清和细胞上清中cAMP、BNP及炎症因子水平。
在体外验证YXT含药血清及胆汁酸对LPS诱导的心肌细胞损伤的保护作用及TGR5通路参与。
使用LPS诱导H9c2细胞炎症损伤,给予YXT含药血清、胆汁酸(CA、DCA、CDCA、LCA)及TGR5激动剂/抑制剂处理,检测细胞活力、TGR5表达和炎症因子水平。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物成分分析 | 超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱 | -- | -- |
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Procell | PM150210 |
| 胎牛血清 | Procell | 164210-50 | |
| 青霉素/链霉素 | Procell | PB180120 | |
| 细胞处理 | 脂多糖 | Sigma | L2630-10MG |
| 胆酸 | MCE | HY-N0324 | |
| 脱氧胆酸 | MCE | HY-N0593 | |
| 鹅去氧胆酸 | MCE | HY-76847 | |
| 石胆酸 | MCE | HY-B0172 | |
| TGR5抑制剂 | MCE | HY-111534 | |
| TGR5激动剂 | MCE | HY-15677 | |
| 动物麻醉 | 异氟烷 | Shenzhen Rayward Life Technology Co., Ltd. | 22090401 |
| 超声心动图 | 高分辨率小动物超声成像系统 | Feieno Technology Co., Ltd. | 6 |
| Western blot | TGR5抗体 | Abcam | ab72608 |
| GAPDH抗体 | Servicebio | GB11002 | |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体 | Servicebio | GB23303 | |
| ELISA | cAMP ELISA试剂盒 | Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd. | A107988 |
| BNP ELISA试剂盒 | Jiangsu Jingmei Biotechnology Co., Ltd. | AF2943-A | |
| IL-1β ELISA试剂盒 | Jiangsu Jingmei Biotechnology Co., Ltd. | AF2923-A | |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Jiangsu Jingmei Biotechnology Co., Ltd. | AF3066-A | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Jiangsu Jingmei Biotechnology Co., Ltd. | AF3056-A |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| CHF大鼠模型建立 | 结扎左前降支冠状动脉,术后心电图确认ST段抬高,4周后超声确认EF约50%,并配合饮食限制。 阅读提示:见2.2节 |
| 药物分组与给药 | YXT剂量:低1.4g/kg、中2.8g/kg、高5.6g/kg,TMZ 0.01g/kg,灌胃给药4周。 阅读提示:见2.2节 |
| 含药血清制备 | 大鼠给予YXT 5.6g/kg/天或生理盐水,连续10天,采血后56℃灭活30分钟,过滤。 阅读提示:见2.3节 |
| H9c2细胞损伤模型 | LPS浓度1μg/L,处理12小时;药物处理24小时;胆汁酸浓度:CA 100μg/mL,DCA 150μg/mL,CDCA 150μg/mL,LCA 30μg/mL,SBI-115 100μg/mL,INT-777 100μg/mL。 阅读提示:见2.3节 |
| 分子检测 | TGR5蛋白表达(Western blot)和mRNA表达(RT-qPCR),内参GAPDH;ELISA检测cAMP、BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α。 阅读提示:见2.4.5-2.4.7节 |