Galunisertib通过TGF-β/TRAF6/Beclin1信号通路减轻小鼠矽肺伴肺纤维化

目的：矽肺以硅结节和弥漫性肺纤维化为特征。迄今为止，尚无有效治疗矽肺的方法。本研究旨在探讨TGF-β受体I激酶抑制剂Galunisertib对SiO2诱导的矽肺小鼠模型和细胞中自噬-溶酶体系统及肺纤维化的影响。方法：我们建立了二氧化硅诱导的肺纤维化小鼠和细胞模型。MTT法用于确定细胞实验的处理时间和剂量。细胞划痕实验用于探讨Galunisertib对二氧化硅刺激的成纤维细胞增殖和迁移能力的影响。通过伤口愈合评估细胞迁移，并通过分子对接和免疫共沉淀（Co-IP）验证TGF-β与TRAF6/Beclin1之间的相互作用。WB和qPCR用于检测各组TGF-β、Col-I和α-SMA的蛋白及转录水平，以及自噬相关蛋白LC3II/I、自噬底物蛋白p62、溶酶体相关膜蛋白LAMP2和通路相关蛋白TGF-β、TRAF6、Beclin1的表达水平。WB还用于检测各组小鼠肺组织和细胞中凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3的表达水平。结果：我们发现Galunisertib在体外和体内均具有良好的抗纤维化活性。4周的Galunisertib治疗显著改善了炎症和纤维化。此外，结果显示Galunisertib抑制TGF-β的表达，下调主要的纤维化蛋白胶原I和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，从而逆转成纤维细胞向肌成纤维细胞转化（FMT）的进程。此外，Co-IP和分子对接实验的证据证实，这种抑制还涉及TRAF6和Beclin1的抑制。因此，Galunisertib给药显著改变了LC3和p62的蛋白水平，提示自噬-溶酶体系统可能参与肺纤维化。结论：这些发现表明，Galunisertib可通过抑制TGF-β/TRAF6/Beclin1信号通路调节矽肺小鼠肺组织和成纤维细胞的自噬。另一方面，Galunisertib调节自噬并抑制二氧化硅刺激的成纤维细胞的活化、增殖和迁移，减轻矽肺小鼠的纤维化。总之，Galunisertib可能是预防肺纤维化的潜在候选药物。