淫羊藿次苷II通过mTOR信号调节减轻肾纤维化：结合网络药理学、分子动力学和体外验证的综合方法

背景：肾纤维化（RF）是慢性肾脏病（CKD）的终末期进展，由于有效的治疗方法有限，仍然是一个挑战。淫羊藿次苷II（ICA-II），一种来自中药淫羊藿的淫羊藿苷代谢物，在治疗糖尿病CKD方面显示出治疗前景。然而，其潜在的分子机制仍然难以捉摸。本研究旨在通过整合网络药理学、分子动力学（MD）模拟和体外实验的综合方法来阐明这些机制。方法：将网络药理学与公共数据库相结合，以鉴定ICA-II靶点和RF相关基因。使用蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络对关键靶点进行优先排序。分子对接和MD模拟评估ICA-II与靶点的相互作用。在体外，用ICA-II处理转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的正常大鼠肾49成纤维细胞（NRK-49F）和人肾2（HK2）细胞，使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定、蛋白质印迹和免疫荧光评估细胞活力、纤维化标志物和信号蛋白。结果：网络药理学揭示了十个关键靶点：AKT1、mTOR、EGFR、ESR1、BCL2、CASP3、TP53、CTNNB1、HSP90AA1和HSP90AB1。关键通路包括PI3K/Akt/mTOR、脂质和动脉粥样硬化、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药。分子对接显示ICA-II与mTOR稳定结合（对接能量：-12 kcal/mol），通过100 ns的MD模拟证实。在NRK-49F和HK2细胞中的体外研究表明，ICA-II直接与mTOR结合，如细胞热位移测定（CETSA）所证明。这种相互作用可能抑制mTOR活性，导致TGF-β1诱导的I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达显著下调。结论：ICA-II通过多靶点、多通路调控网络发挥抗纤维化作用。其在RF中的有益作用可能涉及直接抑制mTOR活性，从而减轻过度的细胞外基质（ECM）积聚。这些发现为ICA-II作为治疗RF的有希望的候选药物提供了理论和实验基础。