建立莱姆关节炎小鼠模型
通过感染伯氏疏螺旋体建立KM小鼠双后肢LA模型,以评估hUC-MSCs的治疗效果。
将伯氏疏螺旋体(5×10^6)接种于KM小鼠双侧后足垫,建立LA模型。
Mesenchymal Stem Cells Reduce Inflammation in a Mouse Model of Lyme Arthritis.
包含体外细胞鉴定、体内动物模型(KM小鼠LA模型)及多维度检测(形态学、影像学、组织学、ELISA、qPCR),并进行了功能验证和机制初探(炎症因子水平)。
KM小鼠莱姆关节炎模型 hUC-MSCs细胞系
hUC-MSCs剂量(低剂量1×10^6细胞/只,高剂量2×10^6细胞/只) 给药方式(右侧后足垫注射,左侧假手术) 给药时间点(第3、6、9天) 检测时间点(第13天) qPCR检测螺旋体载量(flaB基因)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
通过感染伯氏疏螺旋体建立KM小鼠双后肢LA模型,以评估hUC-MSCs的治疗效果。
将伯氏疏螺旋体(5×10^6)接种于KM小鼠双侧后足垫,建立LA模型。
评估低和高剂量hUC-MSCs对LA小鼠后肢肿胀和炎症的影响。
在第3、6、9天,分别向低剂量组和高剂量组小鼠右侧后足垫注射含1×10^6或2×10^6 hUC-MSCs的PBS 50μL,左侧仅刺破(假手术)。对照组注射PBS或仅刺破。
通过形态学、影像学、组织学、ELISA和qPCR评估hUC-MSCs的治疗效果。
在第13天观察后肢肿胀、X射线成像、测量后肢直径,收集胫距关节进行HE染色、ELISA检测IL-6和TNF-α水平,qPCR检测螺旋体载量。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | Barbour-Stoenner-Kelly-II培养基 | -- | -- |
| 兔血清 | Ruite | -- | |
| MSC无血清培养基 | Yocon Biotechnology Co., Ltd | NC0103 | |
| 细胞分化鉴定 | 多向分化诱导试剂盒 | Wuhan Pricella Biotechnology Co., Ltd | PD-017, PD-018, PD-019 |
| 蛋白提取 | RIPA裂解液 | Solarbio Life Sciences | -- |
| ELISA | IL-6 ELISA试剂盒 | Neobioscience Biotechnology Co., Ltd | EMC004 |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Neobioscience Biotechnology Co., Ltd | EMC102 | |
| DNA提取 | TIANamp基因组DNA试剂盒 | TIANGEN BIOTECH (BEIJING) Co., Ltd | DP304 |
| qPCR | NovoStart SYBR qPCR SuperMix Plus试剂盒 | Novoprotein Scientific Co., Ltd | E096 |
| 影像学 | 低剂量牙科X射线机 | Tianjie Electronic Co., Ltd | -- |
| 统计分析 | SPSS | IBM Corporation | version 25 |
| 统计绘图 | GraphPad Prism | GraphPad Software | version 8 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | KM小鼠周龄、性别、感染剂量(5×10^6 B. burgdorferi)、接种体积(50μL)、接种部位(双侧后足垫) 阅读提示:2.4节 |
| hUC-MSCs治疗 | hUC-MSCs剂量(低1×10^6、高2×10^6)、给药体积(50μL)、给药时间(第3、6、9天)、注射部位(右侧后足垫)、左侧假手术 阅读提示:2.4节 |
| 后肢肿胀评估 | 测量方法(游标卡尺)、测量频率(每日)、测量部位(胫距关节) 阅读提示:2.5节 |
| 组织病理学 | 固定液(4%多聚甲醛)、固定时间(48小时)、切片厚度(4μm)、染色方法(HE) 阅读提示:2.6节 |
| 炎症因子检测 | 检测时间点(第3、8、13天)、检测指标(IL-6、TNF-α)、ELISA试剂盒品牌及货号 阅读提示:2.7节 |
| 螺旋体载量检测 | 检测时间点(第13天)、样品(双侧胫距关节)、DNA提取试剂盒、qPCR引物(flaB)、内参(β-actin)、计算方法(flaB拷贝数/10^4 β-actin拷贝数) 阅读提示:2.8节 |