动物感染模型建立
建立Hm感染小鼠模型，观察是否诱导AIH样病变
雄性BALB/c小鼠腹腔注射Hm-17菌液或PBS，分别在4、8、14、22周处死，收集血清和肝脏。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
Helicobacter mastomyrinus 感染诱导小鼠自身免疫性肝炎
Helicobacter mastomyrinus infection induces autoimmune hepatitis in mice.
实验完整度
中研究包含动物模型（BALB/c小鼠）和体外细胞实验（Hepa1c1c7），并进行了组织病理、血清学、免疫组化、分子检测等多层次验证，但缺乏基因敲除或药物干预的功能验证，机制验证有限。
主要模型
雄性BALB/c小鼠 Hepa1c1c7小鼠肝癌细胞系
重点核对
小鼠品系为雄性BALB/c SPF小鼠，6-8周龄 感染途径为腹腔注射0.2 mL Hm-17细菌（OD600=1）或PBS 观察时间点为感染后4、8、14、22周，每组5只小鼠 自身抗体检测采用Hepa1c1c7细胞，血清稀释1:40至1:640
摘要
背景：自身免疫性肝炎（AIH）是一种由免疫系统错误攻击自身肝细胞引起的慢性进行性肝病。肠道微生物组在AIH发病和进展中的作用具有重要意义。然而，合适的动物模型的缺乏严重制约了AIH发病机制和治疗策略的进展。Helicobacter mastomyrinus（H. mastomyrinus，Hm）是一种潜在的人畜共患病原微生物，能够引起啮齿类实验动物的肠肝系统疾病。然而，关于其在肝脏疾病中的作用和机制的研究十分有限。方法：本研究用Hm分离株Hm-17感染雄性BALB/c小鼠，分别在感染后4周、8周、14周和22周处死小鼠。收集血清检测多项AIH指标，包括转氨酶水平、IgG含量和自身抗体水平。此外，检查肝组织的病理学、纤维化、细菌含量和免疫细胞分布。结果：观察到感染最初引起局灶性坏死性肝炎，随后进展为伴有淋巴细胞/浆细胞浸润的界面性肝炎，以及高丙种球蛋白血症和自身抗体反应，主要为抗核抗体和抗平滑肌抗体。此外，随着感染的持续，小鼠肝纤维化和轻度脂肪变性进行性加重。尽管肝脏中Hm定植水平较低，但巨噬细胞、T和B淋巴细胞显著浸润。特别地，Hm感染的肝脏中炎症灶富含IL17+细胞。结论：本研究提供了Hm感染诱导的免疫性肝损伤动物模型，该模型表现出与AIH-1患者相似的主要特征。该模型可能作为研究人类AIH发病机制和潜在治疗策略的新型动物模型。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- Helicobacter mastomyrinus感染是否能在小鼠中诱导类似自身免疫性肝炎的疾病？
- 核心机制
- Hm感染导致肝内IL17+细胞显著浸润而Foxp3+细胞仅轻度增加，提示Treg/Th17失衡，可能造成免疫耐受丧失，进而引发自身免疫性肝炎。
- 主要证据
- Hm感染小鼠表现出进行性肝损伤，包括界面性肝炎、高丙种球蛋白血症、ANA和SMA自身抗体、肝纤维化和脂肪变性；免疫组化显示F4/80、CD3、CD19细胞浸润，免疫荧光显示IL17+细胞富集。
- 研究意义
- 该Hm感染模型可作为研究人类AIH-1发病机制和潜在治疗策略的新型动物模型，并有助于理解肠道病原微生物与AIH发病的关系。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
血清学指标检测
评估AIH相关血清标志物变化
检测血清中ALT、AST、ALP活性，IgG含量及自身抗体（ANA、SMA）滴度。
肝脏病理分析
观察肝脏组织学变化和纤维化程度
肝组织石蜡切片进行H&E和Sirius red染色，评价炎症、坏死、纤维化分期；油红O染色检测脂肪变性。
免疫细胞分布检测
分析肝内免疫细胞组成和功能状态
通过免疫组化检测F4/80、CD3、CD19，免疫荧光检测IL17和Foxp3，分析炎症浸润模式。
细菌定量与宏基因组分析
评估Hm肝脏定植量及对肝脏菌群的影响
qPCR检测肝脏Hm 16S rRNA基因拷贝数；16S rRNA V4区扩增子测序分析肝脏菌群组成。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Sigma-Aldrich | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 细菌培养 | 羊血 | Hope Bio-Technology | -- |
| 幽门螺杆菌选择性添加剂(Dent) | Oxoid | -- | |
| 血清生化分析 | HEMAVET自动化多物种血液学分析仪 | DREW | -- |
| IgG检测 | 小鼠总IgG ELISA试剂盒 | Solarbio | -- |
| 脂质检测 | 甘油三酯含量检测试剂盒 | Solarbio | -- |
| 总胆固醇含量检测试剂盒 | Solarbio | -- | |
| 病理分析 | 徕卡显微镜 | Leica | -- |
| 冰冻切片 | Tissue-Tek O.C.T.包埋剂 | Sakura finetek | -- |
| 冷冻切片机 | Leica | -- | |
| 油红O染色 | 改良油红O染色试剂盒 | Solarbio | -- |
| 免疫组化 | HRP标记山羊抗小鼠二抗 | Proteintech | -- |
| CD3抗体 | Servicebio | -- | |
| CD19抗体 | Servicebio | -- | |
| F4/80抗体 | Servicebio | -- | |
| IL17抗体 | Servicebio | -- | |
| Foxp3抗体 | Servicebio | -- | |
| 间接免疫荧光 | FITC标记山羊抗小鼠二抗 | Proteintech | -- |
| 荧光显微镜 | 荧光显微镜 | Leica | -- |
| DNA提取 | 动物组织基因组DNA提取试剂盒 | Tiangen | -- |
| qPCR | SYBR PremixExTaq试剂盒 | Takara | -- |
| 16S rRNA测序 | Illumina MiSeq/HiSeq测序平台 | Illumina | -- |
| 统计分析 | SPSS 18.0统计软件 | -- | -- |
| 绘图 | GraphPad 8.0作图软件 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系：雄性BALB/c SPF小鼠，6-8周龄；感染途径：腹腔注射0.2 mL Hm-17（OD600=1）或PBS；处死时间：4、8、14、22周；每组5只 阅读提示：Materials and methods 2.2 Animals and animal experiments |
| 血清学检测 | ALT、AST、ALP活性检测；IgG检测血清稀释100倍；自身抗体检测血清稀释1:40至1:640 阅读提示：Materials and methods 2.3 Serological analysis; 2.6 section 2 |
| 病理分析 | 肝组织固定于4%多聚甲醛；H&E、Sirius red、油红O染色；METAVIR评分系统 阅读提示：Materials and methods 2.4 Pathology analysis; 2.5; 2.9 |
| 免疫组化与免疫荧光 | 抗体：CD3、CD19、F4/80、IL17、Foxp3；二抗：HRP标记或FITC标记；封片观察 阅读提示：Materials and methods 2.6 Immunohistochemical and indirect immunofluorescence |
| 细菌定量与菌群分析 | qPCR引物Hs-qF1/Hs-qR1；16S rRNA引物515F/806R；DNA提取；扩增子测序 阅读提示：Materials and methods 2.7 Quantitative Real-time PCR; 2.8 Amplicon sequencing based on 16S rRNA |