臭氧和普鲁卡因增加富含血小板血浆中血小板衍生因子的分泌

Ozone and procaine increase secretion of platelet-derived factors in platelet-rich plasma.

作者信息Chiara Rita Inguscio, Barbara Cisterna, Maria Assunta Lacavalla, Franco Donati, Osvaldo Angelini, Gabriele Tabaracci, Manuela Malatesta
PMID37817677
发布时间2023-10-10
DOI10.4081/ejh.2023.3839

实验完整度

包含体外PRP处理、透射电镜形态学分析和生物分析定量分泌因子,但样本量仅3人,且缺乏功能验证或动物实验。

主要模型

健康志愿者来源的富含血小板血浆 血小板

重点核对

臭氧浓度:16 μg O3/mL O2 普鲁卡因浓度:最终1% 处理时间:20分钟 对照组为空气处理 样本量:3名健康志愿者

摘要

富含血小板血浆(PRP)在再生医学中作为一种创新且有效的治疗方法受到越来越多的关注。PRP的再生特性依赖于血小板释放的多种生物活性分子:生长因子参与内皮细胞和成纤维细胞的增殖和分化、血管生成和细胞外基质形成,而细胞因子主要参与免疫细胞募集和炎症调节。目前正在尝试通过将PRP与能够促进再生过程的试剂结合来提高其治疗潜力。两个有趣的候选者是臭氧(以低剂量作为气态氧-臭氧混合物施用)和普鲁卡因。在本研究中,我们研究了体外用臭氧或普鲁卡因或两者处理PRP对血小板的影响。我们结合透射电子显微镜获取血小板修饰的信息和生物分析测定来定量分泌因子。结果表明,尽管血小板已经被制备PRP的过程激活,但臭氧和普鲁卡因均诱导血小板产生差异性的形态功能修饰,导致因子释放增加。具体而言,臭氧诱导表面突起增加和开放管道系统扩张,提示显著的α-颗粒释放,而普鲁卡因导致表面突起减少和开放管道系统扩张减少,但微泡释放显著增加,提示高分泌活性。一致地,在PRP血清中分析的十三种血小板衍生因子中,有九种在臭氧和/或普鲁卡因处理后显著增加。因此,臭氧和普鲁卡因被证明具有显著的刺激潜力,且不会对血小板造成损伤,这可能是因为它们通过生理性但不同的分泌途径起作用。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
臭氧和普鲁卡因单独或联合处理对PRP中血小板形态和分泌因子的影响。
核心机制
臭氧通过促进α-颗粒胞吐作用,普鲁卡因通过增加微泡释放,两者通过不同的生理分泌途径刺激血小板分泌因子。
主要证据
透射电镜显示臭氧增加表面突起和管道扩张,普鲁卡因增加微泡释放;生物分析显示9/13因子显著升高。
研究意义
臭氧和普鲁卡因是提升PRP治疗潜力的有前景的候选者,但仍需进一步研究。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

PRP制备

获得富含血小板的血浆样品

从3名健康志愿者采血,使用Duografter II细胞浓缩单元双离心法制备PRP。

2

臭氧和/或普鲁卡因处理

评估处理对血小板的影响

将3 mL PRP与气体或药物混合处理20分钟。

3

血小板超微结构分析

观察血小板形态功能变化

透射电子显微镜分析血小板超微结构。

4

生长因子和细胞因子分泌定量

检测分泌因子浓度

使用Luminex技术定量13种血小板衍生因子。

5

统计分析

比较不同处理组间的差异

使用单因素方差分析和Dunn检验进行统计比较。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

验证样本或模型特征
验证分子表达变化

产品清单

实验环节名称品牌货号
Duografter IIFidia Spa--
Push-Out管Fidia Spa--
3.8%枸橼酸钠Fidia Spa--
OZO2 FUTURA仪器Alnitec Srl--
2%盐酸普鲁卡因Fidia Spa--
Philips Morgagni透射电子显微镜FEI Company Italia Srl--
Megaview III相机FEI Company Italia Srl--
Olympus BX51显微镜Olympus Italia Srl--
QICAM Fast 1394数码相机QImaging--
Luminex FLEXMAP 3D仪器Bio-Rad Laboratories--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
PRP制备
抗凝剂种类、离心参数、PRP体积
阅读提示:Materials and Methods 中 PRP样品的制备
处理条件
臭氧浓度、普鲁卡因浓度、处理时间、对照设定
阅读提示:Materials and Methods 中 O3、Pr和Pr+O3处理
电镜分析
固定方法、切片厚度、观察参数
阅读提示:Materials and Methods 中 Ultrastructural analysis 和 Figure legends 2-5
因子定量
检测因子列表、样本体积、重复次数
阅读提示:Materials and Methods 中 Growth factor and cytokine secretion 和 Figure legends 6-7
统计分析
统计检验方法、显著性水平、数据转换方式
阅读提示:Materials and Methods 中 Statistical analysis