5-Aza-2'-脱氧胞苷对T细胞急性淋巴细胞白血病细胞生物学行为及PTEN表达的影响

目的：目前我们面临T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）发病率的急剧增加以及揭示其复杂病因的挑战。脱氧胞苷类似物5-Aza-2'-脱氧胞苷（5-Aza-dC）目前是最常见的核苷甲基转移酶抑制剂。本研究的目的是阐明5-Aza-dC在T-ALL细胞生物学行为和PTEN表达中的作用。材料与方法：将T-ALL细胞系分为实验组（5-Aza-dC溶液处理）和对照组（不处理）。使用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）检测PTEN甲基化。测定细胞增殖、活力、凋亡、侵袭、迁移等后，进行定量逆转录聚合酶链反应（PCR）检测PTEN、DNMT1、DNMT3a、MBD2和MeCP2的表达；western blot检测PTEN、PI3K、AKT和mTOR蛋白表达。此外，在不同组中进行抑制和恢复PTEN表达的拯救实验，以进一步验证前一部分的结果。结果：MS-PCR结果显示，在Jurkat细胞中，使用甲基化引物扩增出PTEN基因启动子区域的目标条带；且在10 μmol/L 5-Aza-dC作用24 h时，PTEN甲基化完全去除，未见非甲基化条带。实验组的细胞增殖率和活力显著降低，凋亡率升高，S期细胞比例减少，侵袭和迁移能力降低；PTEN表达增加，DNMT1、DNMT3a、MBD2和MeCP2 mRNA表达降低；PI3K、AKT和mTOR蛋白表达降低，与对照组相比（均P < 0.05）。此外，根据拯救实验，沉默PTEN表达削弱了5-Aza-dC处理的有益作用，导致细胞增殖率和活力显著升高，凋亡率降低，S期细胞比例增加，细胞侵袭和迁移增加；PTEN表达降低，DNMT1、DNMT3a、MBD2和MeCP2 mRNA表达升高，PI3K、AKT和mTOR蛋白表达升高（均P < 0.05）。而恢复PTEN表达增强了5-Aza-dC处理的功能，导致细胞增殖率和活力明显降低，凋亡率升高，G1期细胞比例增加，细胞侵袭和迁移减少；以及PTEN表达增加，DNMT1、DNMT3a、MBD2和MeCP2 mRNA表达降低，PI3K、AKT和mTOR蛋白表达降低（均P < 0.05）。结论：5-Aza-dC去甲基化治疗可抑制T-ALL细胞恶性生物学行为，并可能增强对化疗药物的敏感性，这可能与抑制DNMT1、DNMT3a、MBD2和MeCP2的表达，以及恢复PTEN的表达活性以负调控PI3K/AKT信号转导有关。我们对PTEN表达的沉默和恢复进一步支持了我们的发现，强调通过5-Aza-dC去甲基化恢复肿瘤抑制基因PTEN的抗肿瘤活性可能是治疗T-ALL的有前景的治疗选择。