疫苗制备和免疫
建立Hib疫苗和Hib+Al疫苗免疫小鼠模型。
使用含10 μg PRP/0.5 mL、蛋白/多糖比2-3的Hib疫苗,部分吸附氢氧化铝佐剂。雌性Balb/C小鼠(12-14 g)在第0天和第14天皮下免疫2.5 μg/剂。
Systematic Evaluation of the Distribution of Immune Cells following Subcutaneous Administration of Haemophilus Influenzae Type B Vaccine to Mice.
包含疫苗免疫小鼠模型,ELISA检测抗体、ELISpot和CBA检测细胞因子、流式分析免疫细胞,但缺乏体外细胞模型和机制干预验证。
Balb/C小鼠 Hib疫苗和Hib+Al疫苗免疫模型
疫苗剂量:2.5 μg/剂,于第0天和第14天免疫 血清和脾脏采集时间:第21天(ELISA、CBA、ELISpot)或第28天(流式) 检测指标:抗PRP抗体及Ig亚型、GCB、细胞因子、免疫细胞亚群 样本量:每组10只(抗体)、5只(细胞因子、流式)或4只(GCB) 统计方法:双尾Mann-Whitney检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立Hib疫苗和Hib+Al疫苗免疫小鼠模型。
使用含10 μg PRP/0.5 mL、蛋白/多糖比2-3的Hib疫苗,部分吸附氢氧化铝佐剂。雌性Balb/C小鼠(12-14 g)在第0天和第14天皮下免疫2.5 μg/剂。
评估疫苗诱导的抗体和生发中心B细胞反应。
通过ELISA检测血清抗PRP抗体及IgM、IgG1、IgG2a、IgG2b亚型;通过流式细胞术分析脾脏中GCB。
评估疫苗诱导的Th1/Th2细胞因子产生。
脾细胞经PRP刺激后用ELISpot检测IFN-γ和IL-4分泌,用CBA检测IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-10水平。
分析疫苗对脾脏免疫细胞亚群的影响。
通过流式细胞术分析CD4+ T、CD8+ T、DC、单核细胞、中性粒细胞、ILC1、ILC2、ILC3以及MHC II表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 流式细胞术 | 纯化抗小鼠CD16/32抗体 | BioLegend | 101302 |
| PE/Cyanine7抗小鼠CD3ε抗体 | BioLegend | 100320 | |
| APC/Cyanine7抗小鼠CD45抗体 | BioLegend | 103116 | |
| Alexa Fluor 700抗小鼠CD4抗体 | BioLegend | 100430 | |
| Brilliant Violet 421抗小鼠/人CD45R/B220抗体 | BioLegend | 103240 | |
| FITC抗小鼠/人GL7抗原抗体 | BioLegend | 144604 | |
| PE抗小鼠CD95(Fas)抗体 | BioLegend | 152608 | |
| Alexa Fluor 700抗小鼠CD45抗体 | BioLegend | 103128 | |
| FITC抗小鼠/人CD11b抗体 | BioLegend | 101206 | |
| PE抗小鼠Ly-6G/Ly-6C(Gr-1)抗体 | BioLegend | 108408 | |
| PE/Cyanine7抗小鼠CD11c抗体 | BioLegend | 117318 | |
| PE抗小鼠CD90.2(Thy-1.2)抗体 | BioLegend | 140308 | |
| FITC抗小鼠CD3抗体 | BioLegend | 100204 | |
| Brilliant Violet 421抗小鼠NKp46抗体 | BioLegend | 137611 | |
| RORγ(t) PE-Cyanine7抗体 | ThermoFisher | 562607 | |
| ELISpot | IL-4酶联免疫斑点试剂盒 | Dakewe Group | 221042 |
| IFN-γ酶联免疫斑点试剂盒 | Dakewe Group | 221005 | |
| CBA | 小鼠Th1/Th2/Th17细胞因子微球阵列试剂盒 | BD | 560485 |
| ELISA | 抗IgG2a抗体 | Abcam | ab170489 |
| 抗IgG2b抗体 | Abcam | ab170322 | |
| 山羊抗小鼠IgG1抗体 | Abcam | ab97240 | |
| 抗IgM抗体 | Abcam | ab106742 | |
| FACS | 红细胞裂解液 | BioLegend | 420301 |
| ELISpot | DMEM培养基 | Gibco | C11995500BT |
| 青霉素-链霉素 | Procell | PB180120 | |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 可固定活性染料eFluor 506 | -- | -- | |
| 流式细胞术 | CytoFLEX S流式细胞仪 | Beckman | -- |
| -- | FlowJo软件(1.0) | -- | -- |
| 统计分析 | GraphPad Prism 8 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物免疫 | 小鼠品系(Balb/C)、性别(雌性)、体重范围(12-14 g)、疫苗剂量(2.5 μg/剂)、免疫时间(第0天和第14天) 阅读提示:4.2. Animals and Immunization |
| 血清抗体检测 | 血清采集时间(第21天)、包被PRP浓度(0.5 Lf/mL)、抗体稀释度(HRP-IgG 1:1000,HRP-IgG1 1:5000等)、检测波长(450 nm和OD630) 阅读提示:4.4. ELISA |
| 细胞因子检测 | 脾细胞数量(5×10^5细胞/孔)、刺激物PRP浓度(4 mg/mL)、刺激时间(36小时)、培养基成分(DMEM+1%青霉素-链霉素+10% FBS) 阅读提示:4.6. ELISpot, 4.7. CBA Analysis |
| 流式细胞术 | 脾脏采集时间(第28天)、抗体染色条件(4-8°C 30分钟)、仪器(CytoFLEX S) 阅读提示:4.5. FACS |