人胆囊永生化上皮细胞系的建立与特性鉴定

背景：尽管已有大量研究采用多种胆囊癌细胞系，但值得注意的是，目前仍缺乏正常的胆囊上皮细胞系作为正常对照，这极大地阻碍了正常上皮细胞向癌细胞转化的机制研究。在此，我们从人胆囊组织中建立了一个名为L-2F7的正常胆囊上皮细胞系。方法：收集一名诊断为胆囊炎的女性患者的胆囊组织，通过磁珠分选富集上皮细胞。然后，通过慢病毒感染系统共导入人端粒酶逆转录酶（hTERT）和猿猴病毒40大T抗原（LT-SV40）使细胞永生化。经过克隆选择和分离，使用Western blot、免疫荧光、全基因组测序、核型分析和RNA测序检测L-2F7细胞的上皮标记物CK7、CK19、CK20和CD326、基因组特征、细胞增殖和迁移。同时将L-2F7细胞移植到裸鼠（nu/nu）中测定致瘤性。结果：我们成功鉴定了一个单细胞克隆L-2F7，其高表达上皮标记物CD326、CK7、CK19和CK20。该细胞系倍增时间为23小时，永生化后上皮形态维持超过30代。L-2F7细胞的瞬时基因转导导致外源性GFP和FLAG蛋白的表达。L-2F7细胞表现出与胆囊癌组织不同的非同义突变，以及与正常组织相似的差异非癌性基因表达模式。尽管它们表现出意外的迁移能力，但L-2F7细胞仍缺乏形成肿瘤的能力。结论：我们开发了一个非癌性胆囊上皮细胞系，为胆囊癌和其他胆囊相关疾病的研究提供了一个有价值的系统。