自噬介导的蛋白质降解：2型糖尿病患者血小板活化和血管紧张素原生成的关键

背景：2型糖尿病（T2DM）呈现血栓形成环境，导致糖尿病大血管病变和微血管病变。本研究评估了T2DM中微血栓形成的调控。方法：使用4D无标记蛋白质组学和生物信息学分析T2DM患者和健康对照的血小板。研究了自噬在T2DM血小板活化和血小板源性血管紧张素原（AGT）转化中的作用。结果：结果显示，补体和凝血级联、血小板活化、代谢通路、内吞、自噬和其他蛋白质消化相关通路被富集。T2DM血小板中关键蛋白AGT的水平升高。氯喹（CQ）以剂量依赖性方式抑制ADP或花生四烯酸（AA）刺激的血小板聚集和颗粒释放，而蛋白酶体抑制剂PYR-41和内吞抑制剂Pitstop 2的作用较弱甚至相反。这表明血小板活化和伴随的蛋白质消化依赖于自噬-溶酶体通路。线粒体自噬发生在新鲜T2DM血小板和ADP或储存刺激的血小板中；CQ抑制了线粒体自噬。然而，线粒体自噬抑制剂Mdivi-1未能表现出与CQ相似的作用。AGT在T2DM血小板和高糖培养基培养的MEG-01细胞来源的血小板中上调，可在体外被ADP刺激的血小板转化为ANGII。最后，经CQ或缬沙坦处理的db/db小鼠肝、脾、心和肾组织中的红细胞水平降低，表明微血栓形成减轻。结论：在血小板中，巨自噬促进蛋白质消化，进而促进血小板活化、ANGII介导的血管收缩和微血栓形成。我们的结果表明，溶酶体是T2DM抗血栓治疗的有希望的治疗靶点。