CD47在抑制性肿瘤微环境及前列腺癌免疫治疗中的作用评估

Evaluation of CD47 in the Suppressive Tumor Microenvironment and Immunotherapy in Prostate Cancer.

作者信息Qianqian Wang, Chunxaing Feng, Yuchun Chen, Tianming Peng, Yong Li, Kunlin Wu, Xiaoyong Pu, Hanzhong Chen, Jiumin Liu
PMID37719086
发布时间2023-09-09
DOI10.1155/2023/2473075

实验完整度

中

包含生物信息学数据库分析(GEPIA、CancerSEA、TISCH、TIMER)和体外吞噬实验,但缺乏体内功能验证或机制验证,且患者样本仅用于免疫荧光验证。

主要模型

小鼠前列腺癌细胞RM-1 小鼠骨髓来源巨噬细胞BMDM 前列腺癌患者组织样本

重点核对

CD47在前列腺癌组织中的表达上调(GEPIA分析) CD47表达与免疫细胞浸润的相关性(TIMER分析) CD47抗体(aCD47)阻断RM-1后巨噬细胞吞噬效率的变化(体外共培养) BMDM分化为M1型巨噬细胞的验证(CD80+比例99.34%)

摘要

背景:CD47在恶性癌细胞中高表达,与SIRP-α结合释放“别吃我”信号,阻止单核巨噬细胞吞噬癌细胞。耐药和转移是前列腺癌内分泌治疗的潜在障碍。尽管免疫治疗在近几十年发展迅速,但治疗前列腺癌的效果并不理想。前列腺癌CD47高表达。因此,研究CD47与前列腺癌中免疫细胞浸润的关系可能为潜在免疫治疗提供新方法。方法:利用GEPIA数据库比较恶性组织和正常组织中CD47的表达丰度。此外,通过CancerSEA评估CD47在前列腺癌中的功能。利用TISCH单细胞数据库评估CD47与肿瘤微环境的关系。通过TIMER探索CD47与前列腺癌免疫浸润的关联。此外,将巨噬细胞与CD47抗体阻断的小鼠前列腺癌细胞RM-1共培养,观察体外吞噬效率的变化。结果:前列腺癌中CD47表达上调,与前列腺癌免疫浸润不良密切相关。CD47抗体阻断促进巨噬细胞对RM-1的吞噬。结论:我们的研究表明CD47与前列腺癌的免疫微环境密切相关,阻断CD47可促进巨噬细胞对前列腺癌细胞的吞噬。因此,CD47可能为前列腺癌的潜在免疫治疗提供新策略。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
CD47在前列腺癌中的表达情况,其与肿瘤微环境及免疫细胞浸润的关系,以及阻断CD47对巨噬细胞吞噬功能的影响。
核心机制
CD47高表达与前列腺癌的免疫抑制微环境相关,可能通过抑制巨噬细胞吞噬作用促进肿瘤免疫逃逸。
主要证据
GEPIA数据库分析显示CD47在前列腺癌中表达上调;TISCH和TIMER分析显示CD47与免疫细胞浸润相关;体外实验证实抗CD47抗体可增强巨噬细胞对RM-1的吞噬。
研究意义
CD47可能作为前列腺癌免疫治疗的潜在靶点,为前列腺癌治疗提供新策略。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

CD47表达差异分析

比较前列腺癌组织与正常组织中CD47的表达水平。

使用GEPIA数据库分析CD47在前列腺癌和正常组织中的表达差异。

2

CD47功能相关性分析

探究CD47与前列腺癌细胞功能状态的相关性。

利用CancerSEA数据库分析CD47与前列腺癌细胞不同功能状态的相关性。

3

CD47与肿瘤微环境单细胞分析

分析CD47在不同免疫细胞中的表达情况及其与肿瘤微环境的关系。

利用TISCH数据库分析前列腺癌原发和转移样本中CD47的表达,重点分析包含转移的PRAD-GSE141445和PRAD-GSE143791数据集。

4

免疫浸润相关性分析

探索CD47表达与前列腺癌免疫细胞浸润的关系。

利用TIMER数据库分析CD47表达与B细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞等免疫细胞浸润的相关性。

5

组织样本免疫荧光验证

验证前列腺癌组织中CD47表达与巨噬细胞浸润的空间关系。

收集5对前列腺癌和正常组织标本,进行免疫荧光染色CD47和CD163,观察共定位。

6

体外吞噬实验

验证阻断CD47能否促进巨噬细胞对前列腺癌细胞的吞噬作用。

从小鼠骨髓提取BMDM,诱导分化为M1型巨噬细胞;用aCD47抗体阻断RM-1细胞,与巨噬细胞共培养,检测吞噬效率。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

评估基因表达差异
功能相关性分析
验证蛋白表达定位
验证吞噬功能
细胞培养与分化
流式细胞术分析

产品清单

实验环节名称品牌货号
DMEM培养基Gibco--
胎牛血清Excell Bio--
青霉素-链霉素Gibco--
巨噬细胞集落刺激因子Sino Biological51112-MNHA
脂多糖SigmaL4391
抗CD47抗体Biolegend127517
PE抗小鼠CD11b抗体Biolegend101208
PE/Cyanine7抗小鼠CD80抗体Biolegend104734
APC抗小鼠F4/80抗体Biolegend123116
CD47抗体SantacruzeSC-12730
CD163抗体Abcamab182422
山羊抗兔IgG (H+L)Abcamab150088
山羊抗小鼠IgG (H+L)Abcamab150117
RM-1细胞系Procell--
红细胞裂解液SolarbioR1010
CytoFLEX流式细胞仪Beckman--
荧光显微镜Nikon--
GraphPad Prism 9软件GraphPad--
PKH67染料----
Dil染料----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
数据获取与分析
数据库版本和筛选条件,如GEPIA、CancerSEA、TISCH、TIMER的具体参数
阅读提示:Methods 2.1-2.3
细胞培养
RM-1细胞的培养条件,如培养基、血清浓度、抗生素浓度、温度、CO2浓度
阅读提示:Methods 2.4
巨噬细胞分化
BMDM提取方法、M-CSF浓度、分化时间、LPS浓度及刺激时间
阅读提示:Methods 2.4和2.6
吞噬实验
抗体阻断浓度、共培养比例、共培养时间、吞噬效率检测方法
阅读提示:Methods 2.6和Results 3.4
免疫荧光
抗体稀释比例、孵育时间、切片处理方法
阅读提示:Methods 2.5