感染模型建立与基因表达分析
鉴定抵抗性小鼠中与抗蠕虫免疫相关的差异表达基因和通路
使用H. polygyrus感染和药物治愈后的二次感染模型，对十二指肠组织进行RNA测序，通过比值比分析鉴定差异表达基因和脂质代谢通路。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
上皮细胞来源的磷脂酶A2组1B是一种内源性抗蠕虫因子
Epithelial-Cell-Derived Phospholipase A2 Group 1B Is an Endogenous Anthelmintic.
实验完整度
高包含体内感染模型、基因敲除小鼠、类器官、体外处理幼虫、脂质组学等多个独立证据层级，并进行功能验证和机制验证。
主要模型
C57BL/6小鼠 Pla2g1b−/−小鼠 Rag−/−cg−/−小鼠 H. polygyrus感染模型
重点核对
H. polygyrus感染模型中的初次感染、药物治愈、二次攻击感染流程（200 L3幼虫口服） Pla2g1b−/−小鼠与野生型小鼠在二次感染中的蠕虫负荷比较 PLA2g1B处理L3幼虫的浓度（10 ng/μL）和时间（24小时） 抗生素混合物处理（庆大霉素、甲硝唑、头孢克洛、万古霉素）对Pla2g1b表达的影响 IL-4R信号对类器官中Pla2g1b表达的负调控
摘要
肠道蠕虫在发展中国家高度流行，慢性感染导致显著的宿主发病。Entwistle等人表明，上皮来源的磷脂酶A2组1B（PLA2g1B）作为一种内源性抗蠕虫因子，通过对感染性幼虫的直接作用对肠道蠕虫感染的抵抗力至关重要。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 肠道蠕虫感染中，宿主清除组织内寄生虫的机制是什么？
- 核心机制
- 上皮细胞来源的PLA2g1B作为内源性抗蠕虫因子，通过直接降低感染性幼虫的磷脂（尤其是磷脂酰乙醇胺）丰度，并协同免疫介导的驱逐机制，从而促进蠕虫清除。
- 主要证据
- Pla2g1b−/−小鼠无法清除二次感染的H. polygyrus和N. brasiliensis，但2型免疫反应正常；用重组PLA2g1B处理L3幼虫可恢复Pla2g1b−/−小鼠的抵抗力；LC-MS显示PLA2g1B处理降低幼虫磷脂丰度。
- 研究意义
- 揭示上皮细胞来源的PLA2g1B作为抗蠕虫免疫中先前被忽视的机制，为增强蠕虫感染的防护提供潜在策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
PLA2g1B在抵抗中的必要性验证
测试PLA2g1B是否对肠道蠕虫清除是必需的
用多种肠道蠕虫感染Pla2g1b−/−和野生型小鼠，比较蠕虫负荷和虫卵计数。
评估2型免疫反应
排除Pla2g1b−/−小鼠中已知的2型免疫驱动的驱逐机制缺陷
通过流式细胞术、ELISA、组织学等方法比较WT和Pla2g1b−/−小鼠的免疫细胞、细胞因子、抗体和杯状细胞增生等。
研究Pla2g1b的表达调控
确定Pla2g1b的表达细胞类型及其调控因素
使用原位杂交、细胞分选和类器官培养分析Pla2g1b的表达，并测试IL-4、IL-13、适应性免疫、先天免疫和肠道菌群的影响。
检测PLA2g1B对幼虫的直接作用
验证PLA2g1B是否直接作用于H. polygyrus幼虫并影响其感染性
用重组PLA2g1B处理脱鞘的L3幼虫，然后进行ATP测定、感染实验、扫描电镜和脂质组学分析。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM/F12培养基 | Life Technologies | -- |
| 基质胶 | R&D system | -- | |
| B27添加剂 | Life Technologies | -- | |
| N-乙酰半胱氨酸 | Sigma | -- | |
| 表皮生长因子 | Life Technologies | -- | |
| 白细胞介素-4 | R&D | -- | |
| 白细胞介素-13 | R&D | -- | |
| 动物实验 | 双羟萘酸噻嘧啶 | Pfizer | -- |
| 抗IL-4抗体 | BioXCell | Cat# BE0045 | |
| 寄生虫处理 | 重组小鼠PLA2g1B蛋白 | Elabscience | Cat# PKSM040953 |
| 马诺阿利得 | Santa Cruz Biotechnology | Cat# sc-200733 | |
| EnzChek磷脂酶A2检测试剂盒 | Invitrogen | Cat# E10217 | |
| CellTiter-Glo发光细胞活力ATP检测 | Promega | Cat# G7571 | |
| RNA-seq | Encore完整RNA-seq文库构建试剂盒 | NuGEN | Cat# 0311 |
| miRNeasy小型提取试剂盒 | QIAGEN | -- | |
| HiSeq 2500测序仪 | Illumina | -- | |
| qPCR | Quantitect反转录试剂盒 | QIAGEN | -- |
| Power SYBR Green PCR预混液 | Applied Biosystems | -- | |
| 7900HT实时荧光定量PCR仪 | Applied Biosystems | -- | |
| 组织学 | RNAscope 2.5试剂盒（棕色） | Advanced Cell Diagnostics | -- |
| VS120-SL玻片扫描仪 | Olympus | -- | |
| 流式细胞术 | MoFlo XDP细胞分选仪 | Beckman Coulter | -- |
| LSRFortessa X-20流式细胞仪 | BD Biosciences | -- | |
| LSRII流式细胞仪 | BD Biosciences | -- | |
| LIVE/DEAD可固定蓝色死细胞染色试剂盒 | Life Technologies | -- | |
| Fc受体阻断剂 | Miltenyi Biotec | -- | |
| ELISA | DuoSet ELISA试剂盒 | R&D | -- |
| 半胱氨酰白三烯和前列腺素E2 ELISA试剂盒 | Enzo | -- | |
| 血清分析 | AZWELL LPC检测试剂盒 | Cosmo Bio | -- |
| 电子显微镜 | Phenom ProX台式扫描电子显微镜 | Phenom-World | -- |
| 脂质分析 | Ultimate 3000高效液相色谱系统 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| Thermo Exactive Plus Orbitrap质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Q Exactive Orbitrap质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| BETASIL二醇柱 | -- | -- | |
| Xcalibur 3.0.63软件 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Progenesis软件 | Nonlinear Dynamics | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| H. polygyrus感染模型 | 感染剂量（200 L3幼虫）、感染途径（口服）、初次感染和二次感染的时间间隔（35或56天）、药物治愈剂量和时间（2.5 mg/dose，第14和15天） 阅读提示：STAR Methods 方法细节中的寄生虫感染和PLA2g1B处理部分 |
| Pla2g1b−/−小鼠 | Pla2g1b−/−小鼠的遗传背景（C57BL/6） 阅读提示：STAR Methods 实验模型和主题细节中的动物品系部分 |
| PLA2g1B处理L3幼虫 | PLA2g1B浓度（10 ng/μL）、处理时间（24小时）、处理缓冲液（EnzChek PLA2反应缓冲液）、幼虫脱鞘方法 阅读提示：STAR Methods 方法细节中的寄生虫感染和PLA2g1B处理部分 |
| 抗生素处理 | 抗生素组合（庆大霉素、甲硝唑、头孢克洛、万古霉素各1 mg/mL）通过饮水给予，处理提前7天开始并持续整个实验 阅读提示：STAR Methods 方法细节中的抗生素处理部分 |
| 类器官培养 | 类器官的建立和培养条件（Matrigel、ENR培养基、Wnt3a-CM撤除时间），IL-4和IL-13刺激浓度（20 ng/mL）和时间（48小时） 阅读提示：STAR Methods 实验模型和主题细节中的类器官培养部分 |