制备Chol-Calix/C6纳米系统
将疏水性香豆素6包封在Chol-Calix纳米载体中,形成荧光纳米系统。
将香豆素6加入Chol-Calix胶体溶液(10 mg/10 mL, 0.6 mM)中,超声、搅拌、离心、过滤,得到黄色胶体分散液。
Calixarene-Based Nanostructures for Delivering Coumarin 6 for Tumor-Cell Imaging and Photoinduced Toxicity.
包含纳米系统制备与表征、分子建模、细胞摄取与竞争抑制实验、光照细胞毒性实验等多个独立证据层级,并包含功能验证。
乳腺癌细胞系 MCF-7 乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 肝癌细胞系 Hep3B 肝癌细胞系 SNU398 正常人真皮成纤维细胞 HuDe
纳米系统制备:Chol-Calix浓度0.6 mM,C6浓度18.7 μM,超声15 min,搅拌3天,离心10000 rpm 15 min 细胞摄取条件:Chol-Calix/C6处理浓度(25 μM Chol-Calix, 0.77 μM C6)及孵育时间1小时 温度对照:37°C与4°C摄取比较 竞争抑制:MCF-7细胞预先孵育不同浓度胆碱(40, 80, 100, 200 mM)30分钟 光动力实验:470 nm激光照射10分钟,MTS法评估细胞活力
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
将疏水性香豆素6包封在Chol-Calix纳米载体中,形成荧光纳米系统。
将香豆素6加入Chol-Calix胶体溶液(10 mg/10 mL, 0.6 mM)中,超声、搅拌、离心、过滤,得到黄色胶体分散液。
验证纳米系统的粒径、形态、稳定性、光物理性质和载药量。
使用UV-vis、荧光光谱、DLS、TEM、Zeta电位等手段表征纳米系统,并测定量子产率和载药量。
从理论上阐明C6与Chol-Calix纳米载体之间的相互作用机制。
构建四种不同的Chol-Calix/C6模型,进行DFT优化和TD-DFT计算,分析结合自由能和光谱。
验证Chol-Calix/C6在光照条件下是否产生光动力效应。
将Chol-Calix/C6与亚甲基蓝混合,用470 nm激光照射,记录不同时间点的吸收光谱。
检测不同细胞系中胆碱转运蛋白的表达水平,并验证细胞模型。
培养多种癌细胞系和正常成纤维细胞,通过Western blot检测SLC44A1/CD92蛋白表达。
评估Chol-Calix/C6在不同细胞中的摄取情况,并验证其与胆碱转运蛋白表达的相关性。
将细胞与Chol-Calix/C6共孵育,通过荧光显微镜检测摄取,并在4°C下进行对照实验。
验证Chol-Calix/C6的摄取是否通过胆碱转运蛋白介导。
MCF-7细胞先用不同浓度胆碱预处理,再与Chol-Calix/C6共孵育,检测荧光强度变化。
评估Chol-Calix/C6在光照条件下对癌细胞的杀伤效果。
MCF-7细胞与Chol-Calix/C6共孵育后,用470 nm激光照射,24小时后通过MTS法检测细胞活力。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 材料购买 | Sigma-Aldrich试剂 | Sigma-Aldrich | -- |
| 合成表征 | Bruker Avance 400 MHz核磁共振波谱仪 | Bruker | -- |
| 光谱表征 | Agilent Technologies 8453 紫外-可见分光光度计 | Agilent Technologies | -- |
| 荧光光谱 | Horiba-Jobin-Yvon荧光光谱仪 | Horiba-Jobin-Yvon | -- |
| 粒度与Zeta电位 | ZetaSizer NanoZS90 | Malvern Instruments | -- |
| TEM | 透射电子显微镜 | JEOL | -- |
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Gibco | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 青霉素 | Invitrogen | -- | |
| 硫酸链霉素 | Invitrogen | -- | |
| 蛋白提取 | RIPA裂解缓冲液 | Cell Signaling Technologies Inc. | -- |
| Western blot | β-肌动蛋白抗体 | Sigma-Aldrich | -- |
| SLC44A1/CD92抗体 | Bioss Antibodies | -- | |
| 光动力实验 | 亚甲基蓝 | -- | -- |
| 细胞活力检测 | CellTiter 96 AQueous One Solution试剂盒 | Promega | -- |
| 细胞染色 | DAPI | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 纳米系统制备 | Chol-Calix浓度(0.6 mM)、C6用量(2.5 mg)、超声时间(15 min)、搅拌时间(3天)、离心速度(10,000 rpm)和过滤膜(0.2 μm GHP) 阅读提示:Methods: Preparation of the Fluorescent Chol-Calix/Coumarin 6 Nanosystem |
| 纳米系统表征 | UV-vis测量波长、荧光激发/发射波长、量子产率测定标准物(荧光素,Φ=0.91) 阅读提示:Methods: Characterization of the Chol-Calix/C6 Nanosystem |
| 细胞摄取 | 细胞接种密度、孵育浓度(25 μM Chol-Calix, 0.77 μM C6)、孵育时间(1 h)、温度(37°C和4°C)、洗涤次数(2次PBS)、固定(4% PFA 10-15 min) 阅读提示:Methods: Cellular Uptake |
| 竞争抑制实验 | 胆碱浓度(40, 80, 100, 200 mM)、预处理时间(30 min)、共处理时间(1 h)、洗涤次数(3次PBS)、荧光定量方法(ImageJ) 阅读提示:Methods: Cellular Uptake of Chol-Calix/C6 in the Presence of Choline Excess |
| 光动力活性 | 激光波长(470 nm)、照射时间(10 min)、细胞密度(5×10^3/孔)、孵育时间(1 h)、检测时间点(24 h后) 阅读提示:Methods: Irradiation of Chol-Calix/C6-Loaded Breast Cancer Cells |