制备水醇提取物
获取葫芦巴叶、茎和根的水醇提取物,用于后续分析
植物材料采自埃塞俄比亚,经干燥、粉碎后,用甲醇/水(4:1)在室温下浸渍72小时,过滤、浓缩、冻干。
Hydroalcoholic Extracts of Cucumis prophetarum L. Affect the Insulin Signaling Pathway in an In Vitro Model of Insulin-Resistant L6 Myotubes.
包含光谱与质谱代谢物分析、体外细胞活力与脂质染色、Western blot信号通路与GLUT4转位验证,多层级证据。
胰岛素抵抗L6肌管细胞(棕榈酸诱导)
L6肌管分化条件 棕榈酸浓度750 μM及处理时间18小时 提取物处理浓度为300 μg/mL,处理6小时 蛋白磷酸化检测位点(IRS-1 Tyr612/Ser307,Akt Ser473等) GLUT4膜转位检测
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取葫芦巴叶、茎和根的水醇提取物,用于后续分析
植物材料采自埃塞俄比亚,经干燥、粉碎后,用甲醇/水(4:1)在室温下浸渍72小时,过滤、浓缩、冻干。
鉴定各提取物的次生代谢物组成
采用UV-Vis光谱、ATR-FTIR和UHPLC-ESI-QqTOF-MS/MS分析提取物。
评估提取物对L6肌管的细胞毒性
L6细胞分化后,用不同浓度(100-500 μg/mL)的提取物处理24小时,MTT法检测活力。
诱导胰岛素抵抗并测试提取物的改善作用
L6肌管用750 μM棕榈酸处理18小时,然后加入300 μg/mL提取物继续处理6小时。
评估提取物对脂质积累的影响
油红O染色定量脂质积累,用异丙醇溶解后测定吸光度,规范化至总蛋白含量。
检测胰岛素信号通路关键蛋白磷酸化水平
提取总蛋白和膜蛋白,SDS-PAGE分离,转膜,用特异性抗体检测P-IRS1、P-AKT、P-GSK3β、P-AMPKα、P-mTOR和GLUT4。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养与处理 | L6细胞培养条件(DMEM+10%FBS,37°C,5% CO2),分化条件(2%FBS),棕榈酸浓度750 μM,提取物浓度300 μg/mL,处理时间 阅读提示:见Materials and Methods 4.4和4.5 |
| 代谢物分析 | 色谱柱规格、流动相梯度、质谱参数(源温度、电压、碰撞能量) 阅读提示:见Materials and Methods 4.3 |
| 蛋白磷酸化检测 | 抗体货号及稀释度,蛋白上样量,内参选择(β-actin或Stain-Free),膜制备方法 阅读提示:见Materials and Methods 4.6 |
| 脂质积累检测 | 油红O染色步骤,定量方法(吸光度与蛋白归一化) 阅读提示:见Materials and Methods 4.7 |