EMC化学成分分析
鉴定EMC中标志性化合物的含量和种类。
采用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器（HPLC-PAD）分析EMC中对香豆酸、芦丁和槲皮素的含量，并与标准品比对。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
苦瓜（Momordica charantia L.）的生物活性化合物在体内和体外下调ACE2和TMPRSS2的蛋白表达
Bioactive Compounds of Momordica charantia L. Downregulate the Protein Expression of ACE2 and TMPRSS2 In Vivo and In Vitro.
实验完整度
高包含体外细胞模型（HepG2、293T）验证药物毒性和蛋白表达抑制，体内小鼠模型验证安全性和多器官蛋白下调，并通过Western blot和免疫组化进行验证。
主要模型
HepG2细胞 293T细胞 C57BL/6小鼠模型
重点核对
EMC浓度（100和250 μg/mL）处理HepG2和293T细胞24小时 化合物浓度（12.5和25 μM）处理细胞24小时 小鼠每日口服EMC（250 mg/kg）连续10天 小鼠分组（每组5只）及对照组（蒸馏水） Western blot和免疫组化检测ACE2和TMPRSS2的表达
摘要
严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）是COVID-19的病原体，其出现导致了全球范围的感染和数百万人的死亡。病毒进入是由病毒刺突（S）蛋白与宿主细胞受体ACE2之间的相互作用启动的，随后由TMPRSS2介导的蛋白水解激活促进膜融合。苦瓜（Momordica charantia L., MC）是一种在热带亚洲广泛使用的传统药用和食用植物，具有显著的抗炎、抗氧化、抗肿瘤和降血糖特性。在本研究中，苦瓜乙醇提取物（EMC）在体外和体内模型中均显著下调ACE2和TMPRSS2的表达，且未引起细胞毒性。此外，从EMC中分离的植物化学物质——包括对香豆酸、芦丁和槲皮素——表现出相当的抑制效果。这些结果表明，EMC及其生物活性成分可能通过调节ACE2/TMPRSS2轴来干扰SARS-CoV-2的进入，突显了它们作为COVID-19预防或管理的天然辅助剂的潜力。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 苦瓜乙醇提取物及其生物活性成分是否能够调节SARS-CoV-2进入宿主细胞所必需的ACE2和TMPRSS2蛋白的表达？
- 核心机制
- EMC及其活性成分通过对香豆酸、芦丁和槲皮素下调ACE2和TMPRSS2蛋白表达，从而可能干扰SARS-CoV-2的进入。
- 主要证据
- 体外实验中，EMC（100和250 μg/mL）和三种化合物（12.5和25 μM）处理HepG2和293T细胞24小时后，Western blot显示ACE2和TMPRSS2蛋白水平显著下降；体内实验中，小鼠口服EMC 250 mg/kg 10天后，Western blot和免疫组化显示肝、肾、肺组织中ACE2和TMPRSS2表达降低。
- 研究意义
- EMC及其活性成分可能作为COVID-19预防或辅助治疗的天然候选物，通过下调病毒进入相关宿主蛋白来降低感染风险。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
细胞毒性评估
确定EMC和相关化合物在实验细胞中的安全浓度范围。
通过MTT法检测EMC（50-500 μg/mL）和化合物（6.25-50 μM）处理HepG2和293T细胞24小时后的细胞活力。
体外蛋白表达抑制检测
评估EMC和活性化合物对ACE2和TMPRSS2蛋白表达的影响。
用非细胞毒性浓度的EMC（100和250 μg/mL）及化合物（12.5和25 μM）处理HepG2和293T细胞24小时，通过Western blot检测ACE2和TMPRSS2表达。
体内安全性评估
评估口服EMC对小鼠的耐受性和潜在毒性。
C57BL/6小鼠每日口服EMC（250 mg/kg）或蒸馏水连续10天，记录体重，并进行肝、肾、肺组织的H&E染色检查。
体内蛋白表达抑制验证
验证EMC在体内对ACE2和TMPRSS2表达的抑制作用。
小鼠口服EMC（250 mg/kg）10天后，通过Western blot和免疫组化检测肝、肾、肺组织中ACE2和TMPRSS2的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| HPLC分析 | TSKgel ODS-80Tm色谱柱 | Tosoh | -- |
| 对香豆酸 | Sigma-Aldrich | C9008 | |
| 芦丁 | Sigma-Aldrich | R5143 | |
| 槲皮素 | Sigma-Aldrich | Q4951 | |
| 细胞培养 | 杜尔贝科改良 Eagle 培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | -- | -- | |
| 细胞活力检测 | MTT试剂 | MedChemExpress | HY-15924 |
| 酶标仪 | Molecular Devices | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | GENESTAR | -- |
| Bio-Rad蛋白定量试剂盒 | Bio-Rad | -- | |
| ACE2抗体 | GeneTex | GTX101395 | |
| TMPRSS2抗体 | GeneTex | GTX100743 | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG | Arigo | ARG65351 | |
| ECL底物 | Merck | -- | |
| 免疫组织化学 | ACE2抗体 | Bioss Inc. | bs-1004R |
| TMPRSS2抗体 | Abcam | ab214462 | |
| 组织学分析 | 尼康ECLIPSE TS100光学显微镜 | Nikon Corporation | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞实验 | 细胞系（HepG2、293T），细胞培养基（DMEM+10% FBS），培养条件（37°C、5% CO2），细胞接种密度（2.5×10^4细胞/孔），处理时间（24小时），EMC浓度（100、250 μg/mL），化合物浓度（12.5、25 μM），对照组（PBS） 阅读提示：参见Materials and Methods 4.3节和4.4节，以及Figure legends 2-5 |
| 动物实验 | 小鼠品系（C57BL/6，雌性，6-8周龄，体重18-20 g），饲养环境（22±2°C、湿度55±10%、12小时光暗循环），EMC剂量（250 mg/kg/天）和给药方式（口服灌胃），给药时间（10天），组别（对照组给予蒸馏水，每组5只），体重测量时间点（0、3、5、10天），组织采集时间（第14天） 阅读提示：参见Materials and Methods 4.6节，Figure legends 6和7 |
| Western blot | 蛋白提取方法（RIPA缓冲液），离心条件（10,000×g, 10 min, 4°C），蛋白定量（Bradford法），SDS-PAGE条件（100 V, 90 min），转膜条件（200 mA, 2 h），封闭（5% BSA），一抗信息（ACE2: GTX101395, 1:500；TMPRSS2: GTX100743, 1:500），二抗浓度（1:5000），检测（ECL底物），定量软件（Kodak Molecular Imaging Software） 阅读提示：参见Materials and Methods 4.5节 |
| 免疫组织化学 | 组织固定（10%中性缓冲福尔马林），切片厚度（4-5 µm），一抗（ACE2: bs-1004R, 1:50；TMPRSS2: ab214462, 1:200），孵育条件（4°C过夜），定量分析软件（ImageJ） 阅读提示：参见Materials and Methods 4.8节，Figure legend 8 |