建立DSS诱导的急性结肠炎小鼠模型
模拟溃疡性结肠炎的肠道炎症和相关的神经炎症及行为变化
成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DSS模型组和褐藻多糖硫酸酯处理组。DSS组和褐藻多糖硫酸酯处理组自由饮用3.5% DSS溶液5天诱导急性结肠炎。褐藻多糖硫酸酯处理组在DSS诱导前7天和期间7天,每天一次口服灌胃200 mg/kg褐藻多糖硫酸酯。
Fucoidan Extracted from Fucus vesiculosus Ameliorates Colitis-Associated Neuroinflammation and Anxiety-like Behavior in Adult C57BL/6 Mice.
研究包含DSS诱导的急性UC动物模型,以及肠道病理、炎症因子、NLRP3表达、胶质细胞激活、BBB蛋白、神经元损伤和行为学等多维度检测,但未进行BBB通透性功能和肠道菌群分析,缺乏体内外机制验证。
C57BL/6J小鼠DSS诱导急性溃疡性结肠炎模型
模型:3.5% DSS溶液自由饮用5天诱导急性UC 干预:褐藻多糖硫酸酯200 mg/kg口服灌胃,每天一次,持续14天(DSS前7天预处理+DSS期间7天) 分组:对照组(生理盐水灌胃+纯净水)、UC模型组(生理盐水灌胃+3.5% DSS饮水)、褐藻多糖硫酸酯处理组(褐藻多糖硫酸酯灌胃+3.5% DSS饮水) 样本量:每组10只小鼠(n=10),行为学测试n=10,部分检测n=3-5 行为学:旷场实验(5分钟)和高架十字迷宫(3分钟)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟溃疡性结肠炎的肠道炎症和相关的神经炎症及行为变化
成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DSS模型组和褐藻多糖硫酸酯处理组。DSS组和褐藻多糖硫酸酯处理组自由饮用3.5% DSS溶液5天诱导急性结肠炎。褐藻多糖硫酸酯处理组在DSS诱导前7天和期间7天,每天一次口服灌胃200 mg/kg褐藻多糖硫酸酯。
验证褐藻多糖硫酸酯对DSS诱导的肠道损伤的保护作用
测量结肠长度,进行H&E染色观察肠黏膜形态和炎症细胞浸润,并通过免疫荧光检测紧密连接蛋白ZO-1和claudin-5的表达。
评估褐藻多糖硫酸酯对DSS诱导的系统性和神经炎症的影响
通过ELISA检测结肠、皮层和血清中TNF-α和IL-6蛋白水平,并通过qPCR检测皮层TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平。
探讨褐藻多糖硫酸酯对炎症小体相关蛋白NLRP3的影响
通过Western blot检测结肠和皮层组织中NLRP3蛋白表达水平,并进行相关性分析。
评估褐藻多糖硫酸酯对肠道巨噬细胞和脑小胶质细胞激活的影响
通过Western blot检测结肠Iba1表达,并通过免疫荧光检测结肠Iba1阳性细胞和皮层小胶质细胞。
验证褐藻多糖硫酸酯对DSS诱导的血脑屏障损伤的保护作用
通过免疫荧光检测大脑皮层中紧密连接蛋白claudin-5的表达。
探讨褐藻多糖硫酸酯对DSS诱导的皮层神经元损伤的保护作用
通过NeuN和DAPI免疫荧光染色观察皮层神经元数量和形态。
评估褐藻多糖硫酸酯对DSS诱导的焦虑样行为的改善作用
在DSS处理结束后,进行旷场实验和高架十字迷宫测试,记录中心区域进入次数、停留时间和移动距离,以及开放臂进入次数和停留时间。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | 褐藻多糖硫酸酯 | Sigma-Aldrich | F8190 |
| 模型诱导 | 葡聚糖硫酸钠盐 | MP Biomedicals | -- |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Keygen Biotech | -- | |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | -- | -- | |
| 磷酸酶抑制剂混合物 | -- | -- | |
| PVDF膜 | -- | -- | |
| 牛血清白蛋白 | -- | -- | |
| SDS缓冲液 | -- | -- | |
| β-肌动蛋白抗体 | Abcam | ab6276 | |
| Western blot/免疫荧光 | Iba1抗体 | Abcam | ab178846 |
| 免疫荧光 | NeuN抗体 | Abcam | ab177487 |
| ZO-1抗体 | Abcam | ab221547 | |
| Claudin-5抗体 | Abcam | ab131259 | |
| Western blot | NLRP3抗体 | HUABIO | SC06-23 |
| 免疫荧光 | 羊抗兔IgG(H+L)交叉吸附二抗,Alexa Fluor™ 488 | Thermo Fisher Scientific | A32731 |
| 羊抗小鼠IgG(H+L)高交叉吸附二抗,Alexa Fluor™ Plus 555 | Thermo Fisher Scientific | A32727 | |
| Western blot | 辣根过氧化物酶标记二抗 | -- | -- |
| SCG-W3000 PLUS凝胶分析软件 | Servicebio | 3.3.2 | |
| Western blot/免疫荧光 | ImageJ软件 | -- | 1.8.0 |
| qPCR | Trizol试剂 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| HiScript II Q RT SuperMix反转录试剂盒 | Vazyme | -- | |
| ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix | Vazyme | -- | |
| Bio-Rad CFX Manager | Bio-Rad | -- | |
| 组织病理学 | 3D Histech数字病理系统 | 3DHistech | -- |
| 免疫荧光 | Leica CM1850冷冻切片机 | Leica Biosystems | -- |
| 抗荧光淬灭封片剂 | Coolaber | -- | |
| ELISA | TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience | -- |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience | -- | |
| 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 行为学分析 | EthoVision XT 11.5行为学分析软件 | Noldus Information Technology | -- |
| 数据分析 | GraphPad Prism 8.0 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系、性别、年龄、DSS浓度、DSS分子量、DSS处理时间 阅读提示:Materials and Methods: Animal Treatment and Behavioral Testing |
| 药物干预 | 褐藻多糖硫酸酯来源、剂量、给药途径、给药频率、给药持续时间、预处理时间 阅读提示:Materials and Methods: Reagents, Animal Treatment and Behavioral Testing |
| 行为学测试 | 旷场实验观察时间、高架十字迷宫观察时间、双盲条件、行为指标定义 阅读提示:Materials and Methods: Animal Treatment and Behavioral Testing |
| 炎症因子检测 | ELISA检测的组织和血清来源、qPCR引物序列、内参基因 阅读提示:Materials and Methods: ELISA, Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction; Supplementary Tables S1 and S2 |
| 蛋白表达分析 | Western blot的蛋白上样量、凝胶浓度、抗体稀释度、内参抗体 阅读提示:Materials and Methods: Western Blot; Primary and Secondary Antibodies; Supplementary Figures S1–S3 |