从纤维化部分肝切除模型中分离和鉴定AFP+/DLK1+双阳性肝干/祖细胞样细胞

背景：肝脏是一个具有强大再生能力的器官。目前，部分肝切除术（PHx）仍然是肝脏疾病各种治疗策略中最有效的选择。当肝脏遭受急性损伤（如PHx）时，剩余的肝细胞变得肥大、重新进入细胞周期、启动增殖并恢复肝功能。然而，确定成体肝干/祖细胞（HSPCs）在这一修复过程中的作用仍然具有挑战性。方法：在本研究中，通过皮下注射四氯化碳（CCl4）至背部8周诱导小鼠肝纤维化。随后，使用2/3 PHx建立纤维化PHx模型。在PHx后12小时、24小时、48小时、4天和7天采集样本。使用定量实时PCR（qRT-PCR）和免疫荧光分析HSPC相关标志物（包括Afp、Dlk1、Ki67和Lgr5）的表达。结果：基因表达分析显示，通过密度梯度差速离心分离，AFP⁺/DLK1⁺双阳性细胞的最高浓度位于50-70%的Percoll层中。预先注射CCl4促进了2/3 PHx后的肝再生，再生高峰期在24-48小时。实验结果表明，AFP+/DLK1+双阳性细胞具有干细胞样特性并参与肝再生。有趣的是，成体和胚胎HSPCs分布在不同的Percoll层，并需要不同的体外培养条件。结论：AFP和DLK1可作为从纤维化PHx模型中选择HSPC样群体的潜在标志物。我们的研究结果表明，纤维化肝脏在PHx后48小时表现出最活跃的再生活性，使其成为分离和提取HSPC样细胞的最佳时期，这仅指标志物表达和增殖，本文结果的关联性仍有待进一步验证。