组织样本采集
获取成年大鼠空肠和结肠组织以分析BMP通路组分的表达和定位。
从6只六周龄雄性Fischer大鼠中获取空肠和结肠组织。
Expression of bone morphogenetic protein signaling pathway players in the jejunum and colon of adult rats.
采用RT-qPCR和免疫组化两种方法,对6只大鼠的空肠和结肠进行表达和定位分析,但未进行功能验证或机制实验
成年Fischer大鼠空肠和结肠组织
组织来源:6周龄雄性Fischer大鼠(Charles River) 组织部位:空肠和横结肠 RT-qPCR内参基因:POLR2A 免疫组化抗体稀释度和货号(见表2)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取成年大鼠空肠和结肠组织以分析BMP通路组分的表达和定位。
从6只六周龄雄性Fischer大鼠中获取空肠和结肠组织。
定量分析BMP配体、受体和拮抗剂在空肠和结肠中的mRNA表达水平。
提取总RNA,逆转录为cDNA,使用SYBR Green进行qPCR扩增,以POLR2A作为内参基因。
确定BMP配体、受体和拮抗剂在空肠和结肠组织中的细胞定位。
对石蜡包埋组织切片进行免疫组化染色,使用特异性一抗和HRP聚合物检测系统,DAB显色,苏木精复染,显微镜观察。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 组织采集 | FastPrep 2 mL裂解基质管 | MP Biomedicals | -- |
| RT-qPCR | Tri试剂 | Molecular Research Center | -- |
| iScript逆转录预混液 | Biorad | -- | |
| ONEGreen FAST qPCR预混液 | Ozyme | -- | |
| Quant Studio 5实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| 免疫组化 | ImmPRESS HRP马抗兔IgG聚合物检测试剂盒 | Vector Laboratories | MP 7801 |
| ImmPRESS HRP马抗小鼠IgG聚合物检测试剂盒 | Vector Laboratories | MP 7802 | |
| BLOXALL封闭液 | Vector Laboratories | -- | |
| 无动物成分封闭液 | Vector Laboratories | -- | |
| Vector DAB底物 | Vector Laboratories | -- | |
| Leica DM 2000显微镜 | Leica | -- | |
| Leica DFC7000 T数字显微镜相机 | Leica | -- | |
| 统计分析 | GraphPad Prism | GraphPad | 10.2.3(403) |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 动物品系、性别、年龄、来源 阅读提示:Methods - Animals |
| 组织采集 | 组织部位(空肠和结肠)、固定液和固定时间 阅读提示:Methods - Animals |
| RT-qPCR | RNA提取试剂、逆转录试剂盒、qPCR试剂、引物序列、内参基因 阅读提示:Methods - RT-qPCR, Table 1 |
| 免疫组化 | 一抗稀释度、货号、检测试剂盒、显色底物、复染剂、观察显微镜 阅读提示:Methods - Immunohistochemistry, Table 2 |
| 统计方法 | 统计软件、检验方法、多重比较校正 阅读提示:Methods - Statistical analysis |