体外细胞毒性评估
确定SBTI对HepG2、HEK293T和Calu-3细胞的安全浓度范围
用不同浓度的SBTI处理细胞24小时,通过MTT法检测细胞活力
Soybean Trypsin Inhibitor Possesses Potency Against SARS-CoV-2 Infection by Blocking the Host Cell Surface Receptors ACE2, TMPRSS2, and CD147.
包含体外细胞毒性、Western blot、动物模型、IHC和Western blot验证,但缺乏SARS-CoV-2直接病毒感染实验和机制验证。
HepG2细胞 HEK293T细胞 Calu-3细胞 C57BL/6小鼠模型
SBTI浓度:125和250 μg/mL处理细胞24小时 SBTI剂量:125和250 mg/kg口服灌胃小鼠14天 检测了ACE2、TMPRSS2和CD147的蛋白表达 使用了HepG2、HEK293T和Calu-3细胞系 使用了C57BL/6小鼠,每组n=6
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
确定SBTI对HepG2、HEK293T和Calu-3细胞的安全浓度范围
用不同浓度的SBTI处理细胞24小时,通过MTT法检测细胞活力
验证SBTI对细胞中ACE2、TMPRSS2和CD147蛋白表达的影响
用SBTI处理细胞24小时后,通过Western blot检测ACE2、TMPRSS2和CD147的表达
评估SBTI口服给药14天对小鼠体重和组织病理的影响
给小鼠口服SBTI 14天,记录体重变化,并进行H&E染色观察肺、肝和肾的组织病理
验证SBTI对小鼠肺、肝和肾组织中ACE2、TMPRSS2和CD147表达的影响
通过IHC染色和Western blot检测小鼠组织中ACE2、TMPRSS2和CD147的表达
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养和细胞活力检测 | 大豆胰蛋白酶抑制剂 | Sigma-Aldrich | T-9128 |
| 细胞活力检测 | MTT试剂 | MedChem Express | HY-15924 |
| Western blot | Bio-Rad蛋白测定试剂盒 | Bio-Rad | -- |
| ACE2一抗 | Genetex | GTX101395 | |
| TMPRSS2一抗 | Genetex | GTX100743 | |
| CD147一抗 | Zen-BioScience | R381696 | |
| 二抗(抗兔IgG抗体)和辣根过氧化物酶偶联物 | Arigo | ARG65351 | |
| ECL底物 | Merck | 201765 | |
| MultiGel-21系统 | TOPBIO | -- | |
| AlphaEaseFC 4.0软件 | Alpha Innotech Corporation | -- | |
| 动物实验 | C57BL/6小鼠 | BioLASCO | -- |
| H&E染色 | 显微镜(ECLIPSE TS100) | Nikon | -- |
| 显微镜相机(ProgRes相机) | Jenoptik AG | -- | |
| IHC染色 | ACE2一抗 | Bioss | bs-1004R |
| TMPRSS2一抗 | Abcam | ab214462 | |
| CD147一抗 | Zen-BioScience | R381696 | |
| Polink-2 Plus HRP兔DAB检测试剂盒 | OriGene | D39 | |
| 统计 | SPSS软件22.0版 | SPSS Inc. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养与处理 | 细胞系来源和培养条件,SBTI处理浓度和时间,细胞活力检测方法 阅读提示:Materials and Methods 4.1 |
| Western blot检测 | 抗体信息,蛋白上样量,凝胶浓度,处理时间 阅读提示:Materials and Methods 4.2 |
| 动物实验 | 小鼠品系、性别、年龄、体重,SBTI剂量和给药方式,给药时间,样本量 阅读提示:Materials and Methods 4.3 |
| H&E和IHC染色 | 组织处理,抗体稀释倍数,染色试剂盒 阅读提示:Materials and Methods 4.4和4.5 |