干扰素刺激基因在组织病理标本中的免疫组织化学分析:一种潜在的病毒感染筛查方法。

Immunohistochemical Profiling of Interferon-Stimulated Genes in Histopathological Specimens: A Potential Screening Approach for Viral Infections.

作者信息Christian Thomsen, Svend Birkelund, Rasmus Røge
PMID40518873
期刊APMIS
发布时间2025-06
DOI10.1111/apm.70034

实验完整度

中

包含临床FFPE样本的IHC分析及细胞培养感染实验,但缺乏动物模型或功能验证,验证层级有限。

主要模型

FFPE临床组织样本(病毒感染与非病毒性炎症) Caco-2细胞(CVB3感染模型)

重点核对

MxA抗体克隆M143,1:400稀释,HIER 48分钟CC1 MxA在病毒感染中的敏感性0.70,特异性0.73 EBV感染5例全部MxA阳性,HPV感染5例全部MxA阴性 CVB3感染Caco-2细胞中ISGs无差异表达

摘要

识别组织病理学标本中的病毒感染可能带来诊断挑战。干扰素刺激基因(ISG)表达增加可能作为此类感染的潜在筛查标志物。本研究对多种组织类型中ISG的免疫组织化学表达进行比较分析,包括正常和炎症组织,涵盖病毒性和非病毒性病因。分析了经确诊的病毒感染(n=27)和非病毒性炎症(n=15)的石蜡包埋(FFPE)组织。构建了组织微阵列(TMA),并使用针对ISG的抗体染色:人粘液病毒抗性蛋白1(MxA)、RIG-I、MDA5、PKR和PD-L1。定性评估比较了它们与每种组织类型的五个正常对照相比的上调情况。MxA在病毒感染中的上调显著高于非病毒性炎症(OR 6.53 [CI 1.59, 26.79]),敏感性和特异性分别为0.70(0.50,0.86)和0.73(0.45,0.92)。其余ISG无显著差异,且具有中等敏感性和低特异性。总之,虽然MxA、PD-L1、PKR、MDA5和RIG-I在大多数病毒感染中普遍显示上调,但存在异质性。MxA有望作为FFPE样本中病毒感染的筛查标志物,但其效用可能因对某些病毒的干扰素反应不足而受限。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
ISG的免疫组织化学表达能否作为FFPE组织样本中病毒感染的筛查标志物?
核心机制
病毒感染诱导I型干扰素产生,进而上调ISGs;部分病毒(如HPV、MCV)通过抑制干扰素反应逃避免疫,导致ISG表达不显著。
主要证据
基于FFPE样本的IHC分析显示,MxA在病毒与非病毒炎症间有显著差异(OR 6.53),而RIG-I、MDA5、PKR、PD-L1无显著差异;CVB3感染Caco-2细胞未观察到ISG差异。
研究意义
MxA有望作为FFPE样本中病毒感染的筛查标志物,但需在更大队列中验证,并注意其可能漏检某些抑制干扰素反应的病毒。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

组织样本收集与TMA构建

收集并组织经病毒或非病毒炎症确认的FFPE样本,用于IHC比较。

收集既往研究的FFPE样本,构建TMA,包含病毒感染(n=27)和非病毒炎症(n=15)样本,以及正常对照。

2

免疫组织化学染色优化

优化ISG抗体的IHC方案,以最小化背景并最大化感染与正常组织间的信号差异。

使用病毒和正常组织TMA,测试不同抗体稀释度、抗原修复条件及信号放大步骤,确定最优方案。

3

IHC染色结果判读

评估ISG在病毒和非病毒炎症样本中的表达情况,并与正常对照比较。

两名病理医生独立判读,比较感染/炎症样本与正常对照的IHC染色强度,记录阳性/阴性。

4

统计分析

评估各ISG在病毒与非病毒炎症间的差异,并计算诊断性能。

为每个ISG构建2x2列联表,计算比值比(OR)、p值(Fisher精确检验)、敏感性和特异性。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
Ventana BenchMark Ultra 仪器Roche Diagnostics--
Dako Omnis 仪器Agilent--
MxA抗体(M143)Sigma-AldrichMABF938
MxA多克隆抗体AbcamAb95926
PKR抗体Bio-techneMAB1980
MDA5抗体Proteintech66770-1-Ig
RIG-1抗体Novus biologicalsNBP2-45678
PD-L1抗体AgilentM3653
SARS抗体Novus biologicalsNB100-56576
CMV抗体DAKOM
HSV抗体DAKOGA52161
EBER探针Roche800-2842
HPV抗体ChemiconMAB837
VP1抗体AgilentM706401-2
ISG15抗体InvitrogenPA5-31865
pIRF3抗体Bioss antibodiesBs-3195R
pIRF7抗体Bioss antibodiesBs-3196R
Optiview DABVentana760-700
Ultraview REDVentana760-501
EnVision FlexDakoGV800
EnVision Flex抗体稀释液Dako--
苏木素IIRoche Diagnostics790-2208
Caco-2细胞ATCC--
柯萨奇病毒B3 Nancy株ATCC--
RPMI 1640培养基----
胎牛血清----
庆大霉素----
甲醛----
低熔点琼脂糖----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
免疫组织化学
抗体克隆、稀释度、抗原修复条件(HIER时间、缓冲液)、孵育时间和可视化系统
阅读提示:见Materials and Methods, Immunohistochemistry部分和Table 1
样本选择
病毒感染类型、非病毒炎症类型、正常对照数量、样本固定时间
阅读提示:见Materials and Methods, Tissue Samples和Table 2
细胞培养
细胞系、病毒株、感染时间、固定条件
阅读提示:见Materials and Methods, Cell Cultures部分
判读标准
阳性判读标准:与正常对照比较,明显强于所有5个正常对照
阅读提示:见Materials and Methods, Interpretation部分
统计分析
统计检验方法、显著性水平、置信区间
阅读提示:见Materials and Methods, Statistics部分