杨梅素通过减轻氧化损伤和凋亡反应保护大鼠免受多柔比星诱导的急性肾损伤

Myricetin protects against doxorubicin-induced acute kidney injury in rats by mitigating oxidative damage and apoptotic response.

作者信息Muhammed Talha Karadogan, Betul Cicek, Kagan Tolga Cinisli, Ali Sefa Mendil, Mustafa Ozkaraca, Furkan Yilmaz, Halis Suleyman
PMID40661077
发布时间2025-06-30
DOI10.3389/fphar.2025.1601628

实验完整度

包含动物模型(大鼠)的体内实验,涉及生化指标、组织病理、免疫组化等多层次检测,但缺少体外或机制深层次验证。

主要模型

Wistar大鼠阿霉素诱导急性肾损伤模型

重点核对

杨梅素口服剂量100 mg/kg,连续10天 多柔比星单次腹腔注射剂量20 mg/kg,第8天给药 大鼠分组:对照组、MYC组、DOX组、MYC+DOX组,每组6只 检测指标:血清BUN和肌酐、肾组织MDA、TOS、GSH、GPx、TAS、MPO、Bax、Bcl-2、caspase-3、AIF

摘要

多柔比星(DOX)是一种有效的抗肿瘤药物,广泛用于治疗多种肿瘤。然而,DOX对健康组织的脱靶毒性,如肾毒性,限制了其临床应用。DOX在肾脏中产生氧化应激和凋亡,刺激细胞毒性信号传导。杨梅素(MYC)是一种重要的天然黄酮类化合物,具有抗氧化和抗凋亡特性。在此背景下,本研究旨在探讨MYC对DOX诱导的肾毒性的肾脏保护潜力。方法:将动物分为四组,每组六只大鼠:对照组、MYC组、DOX组、MYC+DOX组。MYC以100 mg/kg口服给予大鼠10天,DOX在第8天以单次剂量20 mg/kg腹腔注射。检测血清肌酐和血尿素氮(BUN),并对肾脏进行组织病理学分析。在肾组织中测量丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、总氧化状态(TOS)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和总抗氧化能力(TAC)的水平。此外,进行了Bax和Bcl-2蛋白的生化评估,以及caspase-3和凋亡诱导因子(AIF)表达水平的免疫组织化学评估,以评估凋亡。结果:MYC预处理降低了DOX引起的肌酐和BUN水平升高(p < 0.05)。组织病理学结果显示了MYC对肾损伤的肾脏保护作用(p < 0.05),与生化结果一致。此外,MYC通过逆转DOX引起的MDA、TOS和MPO水平的升高以及GSH、GPx和TAS水平的降低,表现出抗氧化特性(p < 0.05)。MYC预处理还显著抑制了DOX诱导的Bax水平升高、caspase-3和AIF表达升高以及Bcl-2水平降低(p < 0.05)。结论:可以推测,MYC对DOX诱导的肾损伤的肾脏保护作用可能是通过其抗氧化和抗凋亡特性介导的。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
杨梅素预处理能否通过抗氧化和抗凋亡机制保护大鼠免受多柔比星诱导的急性肾损伤?
核心机制
杨梅素通过减轻氧化应激(降低MDA、TOS、MPO,升高GSH、GPx、TAS)和抑制凋亡(降低Bax、caspase-3、AIF,升高Bcl-2)来发挥肾脏保护作用。
主要证据
大鼠模型实验显示,杨梅素预处理显著降低DOX升高的BUN和肌酐水平,改善肾组织病理损伤,并逆转氧化应激和凋亡标志物的变化。
研究意义
杨梅素可能成为管理多柔比星诱导肾毒性的候选药物,但需要进一步研究包括药代动力学和临床试验。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立DOX诱导肾损伤大鼠模型及药物预处理

评估杨梅素对多柔比星诱导的急性肾损伤的保护作用

将大鼠分为四组(对照组、MYC组、DOX组、MYC+DOX组),每组6只。MYC组和MYC+DOX组每日口服100 mg/kg MYC,连续10天;DOX组和MYC+DOX组在第8天单次腹腔注射20 mg/kg DOX。

2

评估肾功能指标

检测血清BUN和肌酐水平以评估肾功能变化

在第10天收集血液样本,离心得到血清,使用Roche cobas 8000自动分析仪测量BUN和肌酐水平。

3

肾组织病理学检查

观察肾组织形态学变化以评估肾损伤程度

肾组织固定、脱水、包埋、切片(4μm),H&E染色,光镜下半定量评估间质性肾炎和肾小管变性。

4

检测氧化应激指标

评估肾组织氧化应激水平

测量肾组织中MDA、TOS、GSH、GPx、TAS和MPO的水平。

5

检测凋亡相关蛋白

评估细胞凋亡水平

使用ELISA试剂盒测定Bax和Bcl-2蛋白水平;通过免疫组化评估caspase-3和AIF的表达。

6

统计分析

确定组间差异是否具有统计学意义

使用SPSS 22.0进行统计分析,数据以均值±标准差表示,组间比较使用单因素方差分析及Tukey或Games-Howell事后检验,非参数数据使用Kruskal-Wallis和Mann-Whitney U检验。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
盐酸多柔比星Saba drug industries (Adrimisin®)--
杨梅素Sigma-Aldrich476275
硫喷妥钠I.E., Ulagay--
Roche cobas® 8000自动分析仪Roche--
伊红溶液Sigma Merck318906
光学显微镜LeicaDM2500
TAS试剂盒Rel Assay DiagnosticsRL0017
TOS试剂盒Rel Assay DiagnosticsRL0024
Bax ELISA试剂盒Sunred Biological Technology201-11-0035
Bcl-2 ELISA试剂盒Sunred Biological Technology201-11-0038
过氧化氢Sigma Merck925B
cleaved caspase-3抗体ElabscienceE-AB-30004
AIF抗体BiossBs-0037R
大容量检测系统:抗多价HRPThermofischerTP-125-HL
IBM SPSS统计软件Windows版22.0IBM Corp.--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物分组与给药
大鼠品系、性别、体重、周龄,分组数量,MYC剂量、给药途径、持续时间,DOX剂量、给药途径、给药时间点
阅读提示:Materials and methods: Animals, Experimental induction and drug pre-treatment, Experimental design
肾功能检测
采血时间点,血清分离方法,检测仪器,BUN和肌酐测定方法
阅读提示:Materials and methods: Collection of blood samples and renal tissues, Measurement of kidney function parameters
组织病理学分析
固定液、脱水、包埋、切片厚度、染色方法、评估标准
阅读提示:Materials and methods: Histopathological method
氧化应激指标检测
肾组织匀浆制备方法,MDA、GSH、GPx、TAS、TOS检测方法及试剂盒
阅读提示:Materials and methods: Evaluation of renal oxidative stress and apoptotic parameters
凋亡检测
ELISA检测Bax和Bcl-2的具体步骤,免疫组化检测cleaved caspase-3和AIF的抗体稀释、抗原修复、染色方法及评分标准
阅读提示:Materials and methods: Evaluation of renal oxidative stress and apoptotic parameters, Estimation of immunohistochemical expression of cleaved caspase-3 and AIF