外泌体miR-92b-5p调控N4BP1增强阿霉素耐药的AML中PTEN的单泛素化

目的：阿霉素是急性髓系白血病（AML）治疗的关键药物，但常出现耐药，阻碍治疗成功。尽管外泌体转移与化疗耐药相关，但外泌体miRNAs在阿霉素耐药中的具体作用仍不完全清楚。方法：我们采用miRNA测序来描绘阿霉素耐药的K562/DOX细胞和AML患者中外泌体miRNAs的谱图。随后，利用qPCR检测这些耐药细胞和AML患者中外泌体miR-92b-5p的表达。进行双荧光素酶报告实验以阐明miR-92b-5p与NEDD4结合蛋白1（N4BP1）的直接结合。此外，通过免疫共沉淀（Co-IP）研究了N4BP1与NEDD4、以及NEDD4与PTEN之间的相互作用。同时，通过Co-IP检测了PTEN的泛素化。采用Western blot分析评估N4BP1、NEDD4、PTEN、RAD51以及PI3K-AKT-mTOR通路相关蛋白的表达水平。通过转染miR-92b-5p模拟物和抑制剂进行功能获得和缺失研究，以确定miR-92b-5p在阿霉素耐药中的功能作用。结果：我们的研究发现外泌体miR-92b-5p在阿霉素耐药细胞和AML患者中均上调。此外，miR-92b-5p靶向N4BP1，促进NEDD4介导的PTEN的单泛素化。这改变了PTEN的亚细胞定位，促进核PTEN并减少细胞质PTEN，进而导致RAD51增加以进行DNA修复，并激活PI3K-AKT-mTOR通路促进细胞增殖，从而促成阿霉素耐药。结论：我们的研究揭示了外泌体miR-92b-5p介导阿霉素耐药的新机制，并为克服AML耐药提供了潜在的治疗靶点。