妊娠晚期有症状 SARS-CoV-2 母体感染中胎盘绒毛炎症与凋亡的证据

Evidence of Placental Villous Inflammation and Apoptosis in Third-Trimester Symptomatic SARS-CoV-2 Maternal Infection.

作者信息Manggala Pasca Wardhana, Kuntaman Kuntaman, Budi Utomo, Rozi Aditya Aryananda, Salsabila Nabilah Rifdah, Ifan Ali Wafa, Almira Aulia Shahnaz, Dahlia Ningrum, Nareswari Imanadha Cininta, Grace Ariani, Jan Mm Van Lith, Erry Gumilar Dachlan
PMID38515357
发布时间2024-04
DOI10.3349/ymj.2023.0309

实验完整度

中

该研究为病例对照研究,使用免疫组化和TUNEL检测胎盘蛋白表达和凋亡,并进行亚组相关分析,但缺乏功能实验或机制验证,因此等级为中。

主要模型

第三孕期胎盘绒毛组织

重点核对

病例组纳入标准:有症状且鼻咽PCR阳性;对照组为阴性 样本量:每组32例胎盘样本 检测方法:免疫组化(ACE-2、TMPRSS2、IFN-γ、IL-6、SARS-CoV-2刺突蛋白)和TUNEL凋亡检测 SARS-CoV-2刺突蛋白阳性样本数为8例(25%)

摘要

目的:鉴于关于严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 感染胎盘组织能力的报道存在矛盾,本研究旨在进一步评估妊娠晚期有症状的母体 COVID-19 感染对炎症和胎盘损伤的影响。材料与方法:这项病例对照研究纳入了 32 份有症状 COVID-19 妊娠和 32 份正常非 COVID-19 妊娠的胎盘样本。使用免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 法检测胎盘绒毛区域的炎症表达 [血管紧张素转换酶-2 (ACE-2)、跨膜蛋白酶丝氨酸-2 (TMPRSS2)、干扰素-γ (IFN-γ)、白细胞介素-6 (IL-6) 和 SARS-CoV-2 刺突蛋白] 和凋亡率。基于 COVID-19 感染、胎盘 SARS-CoV-2 刺突蛋白证据和母体严重程度状态进行比较和相关分析。结果:在 COVID-19 组中观察到 TMPRSS2、IFN-γ 和滋养层凋亡率表达升高 (p<0.001),而 ACE-2 和 IL-6 表达与对照组相比无显著差异 (p>0.05)。此外,在 COVID-19 妊娠的 8 份 (25%) 胎盘样本中检测到 SARS-CoV-2 刺突蛋白。COVID-19 亚组分析显示 IFN-γ、滋养层和基质凋亡增加 (p<0.01)。此外,本研究结果未显示母体 COVID-19 严重程度与胎盘炎症及凋亡过程之间存在相关性。结论:SARS-CoV-2 刺突蛋白的存在以及炎症和凋亡过程的改变可能表明妊娠晚期母体 COVID-19 感染中存在胎盘紊乱。胎盘紊乱与母体严重程度状态之间缺乏相关性表明,需要更多研究来了解感染过程及其对 COVID-19 感染孕妇所生所有后代的潜在长期影响。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
妊娠晚期有症状母体COVID-19感染是否导致胎盘炎症和凋亡性损伤,并且这些变化是否与母体疾病严重程度相关?
核心机制
SARS-CoV-2可能通过ACE-2和TMPRSS2侵入胎盘滋养层,诱发IFN-γ介导的炎症反应和滋养层及基质凋亡,但未检测到IL-6显著升高,且与母体严重程度无显著相关。
主要证据
在COVID-19组胎盘中检测到SARS-CoV-2刺突蛋白(25%样本),并观察到TMPRSS2、IFN-γ表达及滋养层凋亡指数显著升高(p<0.001),而ACE-2和IL-6无显著差异;亚组分析显示刺突蛋白阳性组IFN-γ和凋亡指数更高。
研究意义
该研究揭示了SARS-CoV-2直接感染胎盘并引起局部炎症和凋亡的证据,提示需要对COVID-19感染孕妇的婴儿进行长期神经发育随访。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

样本收集与分组

比较COVID-19感染组与正常妊娠组的胎盘病理特征

选取了32例有症状COVID-19妊娠和32例正常妊娠的胎盘样本,排除可能引起细胞因子偏倚的合并症,进行免疫组化和TUNEL分析。

2

检测病毒进入受体表达

评估SARS-CoV-2进入宿主细胞的潜能

通过免疫组化检测ACE-2和TMPRSS2在胎盘绒毛的表达。

3

检测炎症因子表达

评估胎盘炎症反应

通过免疫组化检测IFN-γ和IL-6的表达,并比较COVID-19组与对照组。

4

检测凋亡指数

评估胎盘细胞凋亡程度

使用TUNEL法检测滋养层和基质凋亡指数。

5

检测SARS-CoV-2刺突蛋白

直接检测胎盘中的SARS-CoV-2病毒存在

通过免疫组化定性检测SARS-CoV-2刺突蛋白,并比较阳性与阴性亚组的炎症和凋亡指标。

6

相关性分析

评估母体疾病严重程度与胎盘指标的关系

根据COVID-19严重程度(轻、中、重度)分组,分析各指标间的相关性。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
ACE-2抗体Bioss Antibodybs-1004R
TMPRSS2抗体Bioss Antibodybs-6285R
IFN-γ抗体Bioss Antibodybs-0480R
IL-6抗体Bioss Antibodybs-4539R
SARS-CoV-2刺突蛋白抗体GmbHABIN1030641
TUNEL检测试剂盒Neogen Corporation--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
样本收集
病例纳入标准(有症状且PCR阳性)与对照纳入标准(PCR阴性);排除标准(疫苗接种、肥胖、高血压等)
阅读提示:Materials and Methods: Sample collection, processing, and study design
免疫组织化学
抗原修复条件(柠檬酸缓冲液15分钟、3%过氧化氢封闭20分钟);一抗的稀释度;评分方法(IRS)
阅读提示:Materials and Methods: Immunohistopathological analysis
凋亡检测
TUNEL反应混合物孵育时间与温度;凋亡指数计算方法;视野数
阅读提示:Materials and Methods: Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick-End Labeling (TUNEL) assay
统计分析
统计检验方法的选择(正态性检验);显著性水平
阅读提示:Materials and Methods: Statistical analysis