构建小鼠脊髓损伤模型
建立不同损伤程度的脊髓损伤模型,并评估其稳定性。
对75只成年雌性C57BL/6小鼠进行T10椎板切除术,使用脊髓撞击器以不同深度和相同停留时间(0.4s)和速度(1-2m/s)构建轻度、中度、重度和完全损伤模型,假手术组仅暴露不撞击。术后给予青霉素和人工排尿护理。
Expression of cold-inducible RNA-binding protein in mouse spinal cord injury model.
包含动物模型构建、行为学评分、HE/Nissl染色、免疫荧光检测等实验层级,但缺乏功能获得/丧失验证及下游机制实验。
C57BL/6小鼠脊髓损伤模型(重度损伤组) 脊髓离断模型
小鼠品系与性别:成年雌性C57BL/6小鼠,20-25 g,n=75 脊髓损伤建模方法:T10椎板切除术,脊髓撞击器(68100,RWD)撞击,损伤深度与时间 分组:Sham、轻度、中度、重度、完全损伤组,每组15只 检测时间点:建模后1、3、5、14、21天 免疫荧光检测指标:NeuN、IBA-1、CIRBP
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立不同损伤程度的脊髓损伤模型,并评估其稳定性。
对75只成年雌性C57BL/6小鼠进行T10椎板切除术,使用脊髓撞击器以不同深度和相同停留时间(0.4s)和速度(1-2m/s)构建轻度、中度、重度和完全损伤模型,假手术组仅暴露不撞击。术后给予青霉素和人工排尿护理。
评估不同损伤程度小鼠的运动功能恢复情况。
术前和术后各时间点使用BMS量表对小鼠后肢运动功能进行双盲评分,由两名未参与实验的人员观察。
观察脊髓组织病理变化,评估损伤程度。
取T10脊髓组织,固定、脱水、石蜡包埋、切片(4μm),进行HE染色和Nissl染色,观察组织结构和神经元变化。
检测脊髓组织中NeuN、IBA-1和CIRBP的表达及共定位。
对石蜡切片进行抗原修复、封闭,孵育一抗(NeuN、IBA-1、CIRBP)和二抗(488和594),DAPI封片,使用3D病理切片扫描仪观察。
检测神经元凋亡情况。
在NeuN免疫荧光后,使用TUNEL工作液孵育,DAPI封片,观察凋亡细胞。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型构建 | 小鼠品系、性别、体重、数量;麻醉剂量;手术节段;撞击深度、停留时间、速度;分组方式 阅读提示:参见 Methods 2.2 Construction of mouse spinal cord injury model,Table 1 |
| 行为学评估 | BMS评分时间和方式;双盲评分人员要求 阅读提示:参见 Methods 2.3 Behavioral test |
| 组织病理学染色 | 组织取材位置;固定液成分与时间;脱水梯度与时间;切片厚度;染色时间与试剂 阅读提示:参见 Methods 2.4 Tissue processing,2.5 Hematoxylin-eosin staining,2.6 Nissl stain |
| 免疫荧光 | 抗原修复方式与时间;封闭条件;一抗名称、稀释度、孵育条件;二抗信息;封片剂 阅读提示:参见 Methods 2.7 Immunofluorescence |
| TUNEL染色 | TUNEL试剂盒;孵育条件;复染方式 阅读提示:参见 Methods 2.8 Tunel staining |