利用不同穴位组合电针修复胃溃疡大鼠模型黏膜炎症损伤的转录组学见解

Transcriptomic Insights Into Electroacupuncture Using Different Acupoint Combinations to Repair Mucosal Inflammatory Injury Induced in a Rat Model of Gastric Ulcer.

作者信息Qi Zhang, Tie Li, Hailin Jiang, Jiazhen Cao, He Wang, Zhongke Wang, Qingqing Tang, Ning Yang, Jinying Zhao, Fuchun Wang
PMID40093956
发布时间2025-03-11
DOI10.2147/JIR.S504930

实验完整度

高

包含动物模型、行为学、组织病理、ELISA、氧化应激、转录组测序、RT-qPCR和Western blot等多个独立证据层级,且进行了功能验证和机制验证。

主要模型

Wistar大鼠胃溃疡模型(低温束缚水浸应激法) 合募穴(ST36-CV12)电针组 胃组织样本

重点核对

大鼠品系:SPF级健康雄性Wistar大鼠,10-12周龄,体重220-240g 造模方法:低温束缚水浸应激,4°C冷水中4小时 电针参数:疏密波,2/20 Hz,1 mA,每次20分钟,连续5天 穴位组合:合募(ST36-CV12)、俞募(BL21-CV12)、原络(ST42-ST40) 样本量:每组7只,转录组每组5只

摘要

背景:电针(EA)是治疗胃肠道疾病的一种有前景的方法,然而不同穴位组合的疗效在机制上仍未明确。我们评估了不同穴位组合对胃溃疡大鼠模型中黏膜炎症损伤的治疗效果,并通过转录组学分析剖析其分子机制。方法:采用低温束缚水浸应激法建立GU大鼠模型。对合募(ST36-CV12)、俞募(BL21-CV12)、原络(ST42-ST40)穴位组合进行电针治疗,持续5天。通过被毛评分、粪便含水量百分比、痛阈、体重、脏器指数、组织病理学变化、血清氧化应激水平和胃组织炎症细胞因子水平评价EA治疗效果。转录组分析鉴定相关差异表达基因(DEGs)和中枢信号通路。实时荧光定量PCR和Western blot用于验证中枢通路中主要基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:不同穴位组合的电针不同程度地减轻了GU大鼠的胃黏膜损伤,其中合募组在组织损伤减轻、炎症和氧化应激降低方面表现出更优效果。维恩图转录组分析显示三组间共有的中枢通路为黏着斑。定量验证证实,EA治疗后胃组织中激活的黏着斑通路核心信号转导因子FAK、VCL和EGFR的mRNA、蛋白和磷酸化蛋白表达上调,与其治疗效果一致。结论:我们的结果表明,合募穴组合在三种穴位组合中表现出更优的治疗效果。不同穴位组合的电针不同程度地改善了胃黏膜损伤,并与黏着斑通路相关。FAK、VCL和EGFR是有前景的靶点,需要进一步研究以阐明其在GU中的功能后果。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
不同穴位组合的电针治疗胃溃疡的疗效差异及其分子机制是什么?
核心机制
电针通过上调黏着斑通路核心信号转导因子FAK、VCL和EGFR的表达,增强细胞黏附,促进胃黏膜屏障修复。
主要证据
动物模型显示EA减轻胃黏膜损伤,转录组分析揭示黏着斑为中枢通路,RT-qPCR和Western blot验证FAK、VCL、EGFR及磷酸化蛋白表达上调。
研究意义
为电针不同穴位组合治疗GU的差异机制提供证据,FAK、VCL和EGFR可能成为基因层面修复胃黏膜损伤的候选靶点。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立胃溃疡大鼠模型

模拟胃溃疡病理状态,用于评估电针疗效。

采用低温束缚水浸应激法建立GU模型,大鼠禁食后麻醉固定,置于4°C冷水中4小时。

2

电针干预

比较不同穴位组合电针对GU大鼠的治疗效果。

造模后次日开始,每日电针20分钟,连续5天,分别采用合募、俞募、原络穴位组合。

3

行为学和宏观指标评估

评估EA对GU大鼠整体状态和胃肠道功能的改善作用。

观察被毛评分、粪便含水量、痛阈、体重及脏器指数变化。

4

胃组织病理学分析

观察胃黏膜组织形态和黏液分泌变化,评估黏膜损伤程度。

进行胃组织HE染色和AB-PAS染色,观察组织病理学变化。

5

炎症因子与氧化应激检测

评估EA对GU大鼠炎症反应和氧化应激水平的影响。

用ELISA检测胃组织IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ水平,用生化试剂盒检测血清SOD、NO、MDA。

6

转录组测序及生信分析

鉴定DEGs和关键信号通路,揭示不同穴位组合的分子机制。

对胃组织进行RNA-seq,经DESeq2筛选DEGs,进行GO和KEGG富集分析,并用Venn图寻找共有通路。

7

验证核心通路基因表达

验证黏着斑通路核心基因的mRNA和蛋白表达变化。

用RT-qPCR检测FAK、VCL、EGFR mRNA表达,用Western blot检测FAK、p-FAK、VCL、EGFR、p-EGFR蛋白表达。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
FAK抗体BIOSSBS-20735R
p-FAK抗体BIOSSBS-3159R
VCL抗体ServicebioGB111328
EGFR抗体ServicebioGB11084
p-EGFR抗体ServicebioGB13213-1
GAPDH抗体ServicebioGB15004
IL-4 ELISA试剂盒MEIMIANMM-0191R1
IL-6 ELISA试剂盒MEIMIANMM-0190R1
IL-10 ELISA试剂盒MEIMIANMM-0195R1
IFN-γ ELISA试剂盒MEIMIANMM-0198R1
SOD生化试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA001-1
NO生化试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA013-2
MDA生化试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA003-1
Novaseq 6000测序仪Illumina--
Enspire多功能微孔板读板机PerkinElmer--
ST16R高速冷冻离心机Thermo Fisher Scientific--
SPX70BIII生化培养箱Fesford Instruments--
华佗无菌针灸针Hwato--
华佗SDZ-II电针仪Suzhou Medical Instruments--
Trizol试剂----
HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 反转录试剂盒----
SYBR Green 预混液----
RIPA裂解液----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物模型建立
大鼠品系、性别、年龄、体重、造模前禁食时间、水温、应激时间
阅读提示:Materials and Methods, Generation of the GU Rat Model
电针干预
穴位定位、电针频率、电流强度、波形、每次治疗时长、治疗天数、麻醉维持浓度
阅读提示:Materials and Methods, EA Treatment
行为学评估
被毛评分标准、粪便烘干条件、热板测试参数(光强、时间上限、间隔)
阅读提示:Materials and Methods, Behavioral Assessment
组织病理学
固定液浓度和时间、脱水、包埋、切片厚度、染色方法
阅读提示:Materials and Methods, Histopathological Analysis of Gastric Tissue
转录组测序
样本量(5/组)、RNA提取方法、文库构建方法、测序平台、差异表达阈值、富集分析阈值
阅读提示:Materials and Methods, RNA-Seq Data Analysis
RT-qPCR
引物序列、反应条件、内参基因、计算方法
阅读提示:Materials and Methods, Real-Time Quantitative PCR
Western Blot
裂解条件、蛋白定量方法、抗体信息、封闭液、孵育条件、显色方法
阅读提示:Materials and Methods, Protein Expression Determination Using Western Blot