建立胃溃疡大鼠模型
模拟胃溃疡病理状态,用于评估电针疗效。
采用低温束缚水浸应激法建立GU模型,大鼠禁食后麻醉固定,置于4°C冷水中4小时。
Transcriptomic Insights Into Electroacupuncture Using Different Acupoint Combinations to Repair Mucosal Inflammatory Injury Induced in a Rat Model of Gastric Ulcer.
包含动物模型、行为学、组织病理、ELISA、氧化应激、转录组测序、RT-qPCR和Western blot等多个独立证据层级,且进行了功能验证和机制验证。
Wistar大鼠胃溃疡模型(低温束缚水浸应激法) 合募穴(ST36-CV12)电针组 胃组织样本
大鼠品系:SPF级健康雄性Wistar大鼠,10-12周龄,体重220-240g 造模方法:低温束缚水浸应激,4°C冷水中4小时 电针参数:疏密波,2/20 Hz,1 mA,每次20分钟,连续5天 穴位组合:合募(ST36-CV12)、俞募(BL21-CV12)、原络(ST42-ST40) 样本量:每组7只,转录组每组5只
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟胃溃疡病理状态,用于评估电针疗效。
采用低温束缚水浸应激法建立GU模型,大鼠禁食后麻醉固定,置于4°C冷水中4小时。
比较不同穴位组合电针对GU大鼠的治疗效果。
造模后次日开始,每日电针20分钟,连续5天,分别采用合募、俞募、原络穴位组合。
评估EA对GU大鼠整体状态和胃肠道功能的改善作用。
观察被毛评分、粪便含水量、痛阈、体重及脏器指数变化。
观察胃黏膜组织形态和黏液分泌变化,评估黏膜损伤程度。
进行胃组织HE染色和AB-PAS染色,观察组织病理学变化。
评估EA对GU大鼠炎症反应和氧化应激水平的影响。
用ELISA检测胃组织IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ水平,用生化试剂盒检测血清SOD、NO、MDA。
鉴定DEGs和关键信号通路,揭示不同穴位组合的分子机制。
对胃组织进行RNA-seq,经DESeq2筛选DEGs,进行GO和KEGG富集分析,并用Venn图寻找共有通路。
验证黏着斑通路核心基因的mRNA和蛋白表达变化。
用RT-qPCR检测FAK、VCL、EGFR mRNA表达,用Western blot检测FAK、p-FAK、VCL、EGFR、p-EGFR蛋白表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| Western blot | FAK抗体 | BIOSS | BS-20735R |
| p-FAK抗体 | BIOSS | BS-3159R | |
| VCL抗体 | Servicebio | GB111328 | |
| EGFR抗体 | Servicebio | GB11084 | |
| p-EGFR抗体 | Servicebio | GB13213-1 | |
| GAPDH抗体 | Servicebio | GB15004 | |
| ELISA | IL-4 ELISA试剂盒 | MEIMIAN | MM-0191R1 |
| IL-6 ELISA试剂盒 | MEIMIAN | MM-0190R1 | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | MEIMIAN | MM-0195R1 | |
| IFN-γ ELISA试剂盒 | MEIMIAN | MM-0198R1 | |
| 氧化应激检测 | SOD生化试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A001-1 |
| NO生化试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A013-2 | |
| MDA生化试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A003-1 | |
| 测序 | Novaseq 6000测序仪 | Illumina | -- |
| 微板读取 | Enspire多功能微孔板读板机 | PerkinElmer | -- |
| 离心 | ST16R高速冷冻离心机 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 生化培养 | SPX70BIII生化培养箱 | Fesford Instruments | -- |
| 电针 | 华佗无菌针灸针 | Hwato | -- |
| 华佗SDZ-II电针仪 | Suzhou Medical Instruments | -- | |
| RNA提取 | Trizol试剂 | -- | -- |
| RT-qPCR | HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 反转录试剂盒 | -- | -- |
| SYBR Green 预混液 | -- | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 大鼠品系、性别、年龄、体重、造模前禁食时间、水温、应激时间 阅读提示:Materials and Methods, Generation of the GU Rat Model |
| 电针干预 | 穴位定位、电针频率、电流强度、波形、每次治疗时长、治疗天数、麻醉维持浓度 阅读提示:Materials and Methods, EA Treatment |
| 行为学评估 | 被毛评分标准、粪便烘干条件、热板测试参数(光强、时间上限、间隔) 阅读提示:Materials and Methods, Behavioral Assessment |
| 组织病理学 | 固定液浓度和时间、脱水、包埋、切片厚度、染色方法 阅读提示:Materials and Methods, Histopathological Analysis of Gastric Tissue |
| 转录组测序 | 样本量(5/组)、RNA提取方法、文库构建方法、测序平台、差异表达阈值、富集分析阈值 阅读提示:Materials and Methods, RNA-Seq Data Analysis |
| RT-qPCR | 引物序列、反应条件、内参基因、计算方法 阅读提示:Materials and Methods, Real-Time Quantitative PCR |
| Western Blot | 裂解条件、蛋白定量方法、抗体信息、封闭液、孵育条件、显色方法 阅读提示:Materials and Methods, Protein Expression Determination Using Western Blot |