L-甲硫氨酸通过抑制NR1I2/PCSK9信号促进CD8+ T细胞杀伤肝细胞癌

背景：在恶性肿瘤中，肝癌的发病率和死亡率一直居高不下。PCSK9是高胆固醇血症治疗的一个靶点，最近被确定为抗肿瘤免疫的抑制剂，靶向PCSK9可有效抑制肿瘤进展。然而，由于其扁平蛋白结构，缺乏小分子抑制剂。方法：使用PCSK9启动子驱动的td-Tomato质粒进行PCSK9转录抑制剂筛选。采用实时定量PCR和免疫印迹评估L-甲硫氨酸对肝癌细胞系中PCSK9表达的影响。进行共培养实验以评估L-甲硫氨酸对CD8+ T细胞介导的杀伤肝癌细胞的影响。利用RNA测序、CUT&Tag、基因编辑和荧光素酶报告基因实验来鉴定调控PCSK9的转录因子。此外，使用肝癌异种移植和自发性肝癌小鼠模型评估L-甲硫氨酸的抗癌效果。结果：我们的研究确定L-甲硫氨酸（一种必需氨基酸）是PCSK9的转录抑制剂。在体外，抑制PCSK9表达和增强CD8+ T细胞介导的杀伤肝癌细胞的最佳L-甲硫氨酸剂量为50 μM。此外，腹腔注射5 mg/kg/天的L-甲硫氨酸在肝癌异种移植和自发性肝癌小鼠模型中均显著抑制肿瘤生长。在机制上，我们确定NR1I2是PCSK9的关键转录因子，它们的关键结合位点为TGCACCCTGACAC。L-甲硫氨酸通过下调NR1I2来抑制PCSK9转录。结论：这项工作表明，L-甲硫氨酸通过抑制NR1I2/PCSK9信号促进CD8+ T细胞介导的杀伤肝细胞癌。我们的研究介绍了一种新颖且方便的方法来抑制PCSK9，并为肝癌患者合理补充L-甲硫氨酸提供了理论基础。