一种通过在细胞膜上稳定呈递Pre-S抗原的多价mRNA治疗性疫苗在HBV免疫耐受和病毒抑制方面取得突破

背景/目标：在慢性乙型肝炎感染中，乙型肝炎表面抗原持续消耗乙型肝炎表面抗体，导致免疫耐受的形成。因此，通过抑制乙型肝炎表面pre-S1/pre-S2抗原与肝细胞受体NTCP的结合可以阻断HBV感染，但基于pre-S的CHB治疗性疫苗的临床治愈率有限。方法：在本研究中，我们设计并制备了编码三种乙型肝炎表面抗原蛋白（L、M和S）的多价乙型肝炎治疗性mRNA疫苗，并通过体外转染和表达实验进行了验证。首先完成了HBV转基因小鼠的体内免疫实验。随后，构建了携带HBV1.2倍基因组的腺相关病毒质粒载体模型和携带HBV1.3倍基因组的腺相关病毒载体模型，并用mRNA疫苗进行免疫。检测了血清中的HBV抗原、抗体和HBV DNA。采用间接酶联免疫吸附试验分析HBV Tg小鼠中活化的抗原特异性IgG。进行了抗原依赖性T细胞活化实验以及小鼠急性毒性试验。结果：在S蛋白（和M蛋白）的支持下，L蛋白/pre-S抗原可以在细胞膜上稳定呈递。接种疫苗后，疫苗有效重新激活了高水平HBsAb的产生，破坏了免疫耐受，并在HBV Tg小鼠中激活了针对结构性pre-S抗原的高亲和力抗体的产生。在两种HBV小鼠模型中实现了HBsAg血清学转换和血清HBV DNA清除。此外，证实了针对HBV感染的pre-S抗原依赖性T细胞反应。该治疗性疫苗在小鼠中也显示出安全性。结论：开发了一种新型治疗性mRNA疫苗，通过在膜上稳定呈递pre-S抗原，突破HBsAg介导的免疫耐受并治疗CHB，该疫苗具有功能性治愈CHB的巨大潜力。