建立DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠模型
模拟人类UC的急性炎症状态，为评估PD的治疗效果提供动物模型。
BALB/C小鼠自由饮用3.5% DSS水溶液7天建立急性UC模型，同时给予不同剂量的PD或SASP治疗。
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白头翁汤通过激活FXR-ASBT通路改善胆汁酸稳态紊乱缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎
Pulsatilla decoction alleviates DSS-induced UC by activating FXR-ASBT pathways to ameliorate disordered bile acids homeostasis.
实验完整度
中包含DSS诱导的UC小鼠模型、组织病理学分析、ELISA、PCR Array和Western blot验证，但缺乏细胞实验或类器官等多层级证据。
主要模型
BALB/C小鼠DSS诱导急性溃疡性结肠炎模型
重点核对
DSS浓度为3.5% wt/vol，自由饮用7天 PD给药剂量：10.8、5.4、2.7 g/kg 阳性对照SASP剂量：0.45 g/kg
摘要
民族药理学相关性：白头翁汤(PD)是治疗溃疡性结肠炎的经典方剂。先前的研究表明，PD的疗效与法尼醇X受体(FXR)的激活密切相关。FXR的活性受顶端钠依赖性胆汁酸转运体(ASBT)的调节，以胆汁酸受体FXR为核心的FXR-ASBT级联反应在维持胆汁酸代谢稳态以预防溃疡性结肠炎(UC)的发生和进展中起着关键作用。研究目的：阐明PD对葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导的溃疡性结肠炎发挥保护作用的潜在机制，重点关注FXR和ASBT的调节。材料与方法：为建立急性溃疡性结肠炎模型，BALB/C小鼠饮用水中给予3.5% DSS连续7天。采用疾病活动指数(DAI)评估各组小鼠的临床症状。使用糖原雪夫氏过碘酸(PAS)和阿利新蓝染色评估结肠组织中杯状细胞的表达。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和结肠组织中炎性细胞因子的表达。利用PCR Array芯片筛选PD治疗UC中与FXR-ASBT通路相关的88个差异基因。采用Western blotting(WB)分析检测小鼠结肠组织中差异表达基因的蛋白表达水平。结果：PD治疗有效降低了疾病活动指数(DAI)评分，减轻了结肠组织病理损伤，同时恢复了体重和结肠长度。此外，它显著减轻了溃疡性结肠炎(UC)的严重程度，调节了炎症，调节了杯状细胞数量，并恢复了胆汁酸平衡。此外，PCR Array分析鉴定出21个参与FXR-ASBT通路的差异表达基因。Western blot结果显示，PD治疗后FXR、GPBAR1、CYP7A1和FGF15蛋白表达水平显著恢复；此外，观察到ABCB11和RXRα表达水平有升高的趋势。结论：PD对UC小鼠的治疗效果显著，可能归因于其调节胆汁酸稳态、增强肠道屏障功能和减轻肠道炎症。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 阐明白头翁汤(PD)对DSS诱导的溃疡性结肠炎(UC)的保护作用及其分子机制，重点关注FXR和ASBT的调节。
- 核心机制
- PD通过调节FXR-ASBT信号通路，恢复FXR、GPBAR1、CYP7A1、FGF15等蛋白表达，抑制ASBT，从而改善胆汁酸稳态、增强肠道屏障功能并减轻肠道炎症。
- 主要证据
- 在DSS诱导的UC小鼠模型中，PD治疗显著降低DAI评分、改善结肠病理损伤、恢复杯状细胞数量、调节炎症因子（降低IL-1β、IL-17、IL-23，升高IL-10）、改善血清总胆汁酸和胆固醇水平；PCR Array筛选出21个差异基因，Western blot验证FXR、GPBAR1、CYP7A1、FGF15蛋白显著恢复，ABCB11和RXRα有上调趋势。
- 研究意义
- 该研究为PD治疗UC的临床应用提供了重要的理论基础，表明PD可能通过调节FXR-ASBT通路改善胆汁酸代谢和肠道炎症。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估PD对UC小鼠临床症状及病理损伤的影响
验证PD对UC小鼠体重、结肠长度、DAI评分及结肠组织病理损伤的改善作用。
每日记录体重、粪便性状和便血程度，计算DAI；实验结束后测量结肠长度，进行HE染色观察组织病理。
检测杯状细胞数量及炎症因子水平
评估PD对UC小鼠肠道屏障功能及炎症反应的调节作用。
使用PAS和AB染色观察结肠组织杯状细胞数量；ELISA检测血清和结肠组织中IL-1β、IL-10、IL-17、IL-23水平。
检测血清总胆汁酸和总胆固醇水平
评估PD对UC小鼠胆汁酸代谢的影响。
用试剂盒检测血清中TBA和T-CHO水平。
PCR Array筛选FXR-ASBT通路相关差异基因
筛选PD治疗UC过程中与FXR-ASBT通路相关的差异表达基因。
提取结肠组织RNA，使用RT2 Profiler PCR Array检测88个基因的表达，并进行生物信息学分析。
Western blot验证关键蛋白表达
验证PCR Array筛选出的关键基因在蛋白水平的表达变化。
提取结肠组织蛋白，通过Western blot检测FXR、GPBAR1、CYP7A1、ASBT、ABCB11、RXRα、FGF15、CYP27A1的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | 葡聚糖硫酸钠 | Reed Biotechnology Co. | -- |
| 阳性对照药物 | 柳氮磺吡啶肠溶片 | Shanghai Xinyi Tianping Pharmaceutical Co | H31020557 |
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC001b.96 |
| IL-10 ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC005.96 | |
| IL-17 ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC008.96 | |
| IL-23 ELISA试剂盒 | Neobioscience Technology | EMC114.96 | |
| 血清生化检测 | 总胆固醇检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A11111 |
| 总胆汁酸检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | E00321 | |
| RNA提取 | RNeasy Mini 试剂盒 | QIAGEN | 74104 |
| cDNA合成 | RT2第一链试剂盒 | QIAGEN | 330401 |
| PCR Array | RT2 SYBR Green ROX qPCR 预混液 | QIAGEN | 330502 |
| RT2定制PCR芯片 | QIAGEN | 330171 | |
| Western blot | RIPA裂解液 | Solarbio | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Solarbio | pc0020 | |
| PVDF膜 | Millipore | -- | |
| β-actin抗体 | Proteintech | 20536-1-AP | |
| FXR/NR1H4抗体 | Bioss | bs-12867R | |
| CYP7A1抗体 | Bioss | bs-21430R | |
| ASBT/SLC10A2抗体 | Bioss | bs-23146R | |
| CYP27A1抗体 | Bioss | bs-5049R | |
| ABCB11抗体 | -- | Ab-AF7593 | |
| RXRα抗体 | Bioss | bs-20769R | |
| TGR5/GPBAR1抗体 | CUSABIO | CSB-PA819471LA01HU | |
| FGF15抗体 | CUSABIO | CSB-PA522052LA01MO | |
| HRP标记亲和纯化山羊抗兔IgG (H+L) | Proteintech | SA00001-2 | |
| 组织病理学 | Leica DFC显微镜拍照系统 | Leica | -- |
| ELISA | 酶标仪 | Molecular Device | -- |
| Western blot | Amersham Imager 600化学发光仪 | GE Healthcare Bio-Sciences AB | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | DSS浓度、造模时间、动物品系、性别、年龄、体重 阅读提示：Methods 3.2 Establishment of DSS-induced UC mice model and PD treatment; Animals section |
| 药物处理 | PD剂量、给药方式、给药时间、阳性对照SASP剂量 阅读提示：Methods 3.2 Establishment of DSS-induced UC mice model and PD treatment |
| 组织病理学分析 | HE染色、PAS和AB染色的具体操作步骤 阅读提示：Methods 3.4 Histological evaluation and 3.5 Detection of goblet cells |
| 炎症因子检测 | ELISA试剂盒货号、检测波长、样本类型 阅读提示：Methods 3.6 Measurement of cytokines in serum and colon tissue |
| PCR Array | RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒、PCR芯片型号、分析方法 阅读提示：Methods 3.8 The PCR array chip was used to identify differentially expressed genes associated with the FXR-ASBT pathway |
| Western blot | 抗体信息（品牌、货号）、蛋白上样量、电泳条件、封闭条件 阅读提示：Methods 3.9 Western blot analysis |