纳米颗粒制备与表征
制备并表征UROEE、CsNPs及UROEE-CsNPs,确认其形态和尺寸。
用离子凝胶法制备CsNPs,将超声处理的迷迭香乙醇提取物负载到CsNPs上形成UROEE-CsNPs,并通过SEM和TEM观察形态和尺寸。
Prophylactic and Therapeutic Efficacy of Ultrasonicated Rosmarinus officinalis Ethanolic Extract and its Chitosan-Loaded Nanoparticles Against Eimeria tenella Infected Broiler Chickens.
研究包含体外纳米颗粒表征、分子鉴定、动物感染模型、组织病理学、免疫组化、基因表达等多个独立实验层级,并进行了功能验证和机制验证。
Ross肉鸡 Eimeria tenella感染模型
感染剂量:初次感染4×10⁴个孢子化卵囊,二次感染8×10⁴个孢子化卵囊 治疗组给药方式:感染后5天连续口服5天,剂量为UROEE 100 mg/kg体重、CsNPs 20 mg/kg体重、UROEE-CsNPs 20 mg/kg体重 预防组给药方式:从第1天至第42天日粮中添加UROEE 100 mg/kg、CsNPs 20 mg/kg、UROEE-CsNPs 20 mg/kg 组织取样时间:预防组在27日龄(6 DPPI)和41日龄(6 DPSI),治疗组在31日龄(6 DPT)和41日龄(6 DPSI) 统计方法:使用SPSS进行单因素方差分析和Tukey HSD检验,P<0.05为显著性
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
制备并表征UROEE、CsNPs及UROEE-CsNPs,确认其形态和尺寸。
用离子凝胶法制备CsNPs,将超声处理的迷迭香乙醇提取物负载到CsNPs上形成UROEE-CsNPs,并通过SEM和TEM观察形态和尺寸。
获得并确认E. tenella卵囊的纯度和感染性。
从自然感染鸡的盲肠收集卵囊,在2.5%重铬酸钾溶液中孢子化,并用PCR扩增ITS-1区域进行分子鉴定。
建立预防和治疗模型,评估不同处理的体内效果。
将165只一日龄Ross肉鸡随机分为11组,包括阴性对照、阳性对照、添加剂组、预防组和治疗组。在21日龄进行初次感染,35日龄进行二次感染。
评估各处理对E. tenella繁殖的抑制作用。
从感染后4天起,每隔两天收集新鲜粪便,使用McMaster计数室法计算每克粪便中的卵囊数(OPG)。
评估盲肠组织的病理变化和药物干预的组织修复效果。
在特定时间点收集盲肠组织,固定、包埋、切片(5 µm),H&E染色,光镜观察。
检测盲肠组织中T淋巴细胞亚群的蛋白表达水平。
使用抗鸡CD4和CD8多克隆抗体进行免疫组化染色,半定量分析阳性细胞表达。
评估促炎和抗炎细胞因子mRNA表达的变化。
提取盲肠组织RNA,逆转录成cDNA,通过半定量RT-PCR分析IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TGF-β4的mRNA表达,以GAPDH为内参。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 纳米颗粒制备 | 壳聚糖 | Oxford, Mumbai, India | -- |
| 三聚磷酸钠 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 冰乙酸 | ADWIC, Egypt | -- | |
| 无水乙醇 | ADWIC, Egypt | -- | |
| 纳米颗粒表征 | 扫描电子显微镜 | JEOL | JSM-IT-100 |
| 透射电子显微镜 | JEOL | JEM 2100 | |
| 分子鉴定 | QIAamp DNA粪便迷你试剂盒 | Qiagen | -- |
| Nanodrop One微量紫外可见分光光度计 | Thermo Scientific™ | -- | |
| PCR预混液 | Bioline | -- | |
| 热循环仪 | SENSOQUEST | Lab cycler | |
| DNA上样缓冲液 | enzynomics | B002S | |
| 50 bp DNA标记 | iNtRON Biotechnology | 24072 | |
| 溴化乙锭 | -- | -- | |
| 紫外透射仪 | VWR International | Photo-Doc-It™ | |
| 组织病理学 | 光学显微镜 | LEICA | DM650 |
| 显微相机 | LEICA | ICC50 HD | |
| 免疫组织化学 | 抗鸡CD4蛋白多克隆抗体 | BiOSS ANTIBODIES | bs-0647R-TR |
| 抗鸡CD8α蛋白多克隆抗体 | BiOSS ANTIBODIES | bs-4791R | |
| UltraVision One HRP聚合物 | -- | -- | |
| DAB显色剂 | -- | -- | |
| 旋转切片机 | Reichert-Jung | 820 H | |
| 基因表达 | RNA保护液 | BioFlux | BSC54M1 |
| Simply P总RNA提取试剂盒 | BioFlux | BSC52M2 | |
| EasyScript®第一链cDNA合成SuperMix试剂盒 | TransGen Biotech | AE301 | |
| 2X TOPsimple™ DyeMix-nTaq | enzynomics | 170523 | |
| Techne TC-3000X PCR热循环仪 | Techne | TC-3000X | |
| ImageJ软件 | -- | Java 1.83.0 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物分组与感染 | 分组数量、每组鸡数、感染剂量、感染时间点 阅读提示:Methods: Experimental Design, Diets and Infection |
| 预防组处理 | 添加剂剂量、给药方式(日粮添加)、给药持续时间 阅读提示:Methods: Feeding of Experimental Broiler Chickens, 表3注 |
| 治疗组处理 | 治疗触发时间、治疗持续时间、给药方式、剂量 阅读提示:Methods: Experimental Design, Diets and Infection |
| 卵囊计数 | 粪便收集时间点、计数方法 阅读提示:Methods: Measurements, Oocysts Output |
| 组织病理学和免疫组化 | 取样时间点、组织部位、固定方式、切片厚度、抗体信息和染色方法 阅读提示:Methods: Histopathological Studies, Immunohistochemical Studies |
| 基因表达分析 | 组织取样时间点、RNA提取方法、引物序列、PCR条件、内参基因 阅读提示:Methods: Gene Expression of Some Immune Genes..., Table 2 |