化瘀祛痰方通过mTORC1/TFEB/ABCA1-SCARB1信号轴促进脂噬和胆固醇外流

本研究旨在探讨化瘀祛痰方（HYQT）抑制泡沫细胞形成的抗动脉粥样硬化作用机制。在体内，小鼠随机分为三组：CTRL组、MOD组和HYQT组。HYQT组每天两次口服HYQT（20.54 g/kg/d），通过苏木精-伊红（HE）染色和油红O（ORO）染色观察ApoE−/−小鼠的斑块形成。通过CD11b荧光标记和BODIPY荧光探针检测主动脉巨噬细胞与脂滴（LDs）的共定位。在体外，RAW 264.7细胞暴露于50 μg/mL ox-LDL处理48小时，然后用HYQT处理24小时。通过ORO和BODIPY评估LDs的积累。使用CCK-8法评估细胞活力。通过免疫荧光和荧光探针检测LC3b和BODIPY的共定位。LysoTracker Red和BODIPY 493/503分别用作溶酶体和LDs的标记物。通过透射电子显微镜观察自噬体形成。通过Western blot检测LC3A/B II/LC3A/B I、p-mTOR/mTOR、p-4EBP1/4EBP1、p-P70S6K/P70S6K和TFEB蛋白水平，而SQSTM1/p62、Beclin1、ABCA1、ABCG1和SCARB1通过qRT-PCR和Western blot检测。通过免疫荧光检测TFEB的核转位。通过Q-Orbitrap高分辨率质谱分析确定HYQT含药血清的成分。采用分子对接鉴定HYQT含药血清中与mTOR信号通路相关的成分。阐明了牛磺酸的作用机制。HYQT对ApoE−/−小鼠的动脉粥样硬化斑块形成和血脂水平有显著影响。HYQT降低了CD11b和BODIPY的共定位。HYQT（10%含药血清）减少了RAW 264.7细胞中的LDs积累。HYQT和RAPA（雷帕霉素，mTOR抑制剂）能促进胆固醇外流，而氯喹（CQ，自噬抑制剂）削弱了HYQT的作用。此外，MHY1485（mTOR激动剂）也通过减少胆固醇外流削弱了HYQT的作用。qRT-PCR和WB结果表明，HYQT改善了蛋白质ABCA1、ABCG1和SCARB1的表达。HYQT通过mTORC1/TFEB信号通路调节ABCA1和SCARB1蛋白。然而，ABCG1的激活不依赖于该通路。Q-Orbitrap高分辨率质谱分析结果表明，七种核心化合物与mTOR蛋白具有良好的结合能力。牛磺酸可能在机制调控中发挥重要作用。HYQT可能通过促进胆固醇外流和降解巨噬细胞源性泡沫细胞形成来降低心血管风险。已观察到HYQT和ox-LDL通过mTOR/TFEB信号通路调节脂噬，而不是mTOR/4EBP1/P70S6K通路。此外，发现HYQT通过mTORC1/TFEB/ABCA1-SCARB1信号轴调节胆固醇外流，而牛磺酸在脂噬中起重要作用。