野生黄鼠(<em>Citellus dauricus</em> Brandt)卵巢中催乳素、催乳素受体和STAT5的季节性表达模式

Seasonal patterns of prolactin, prolactin receptor, and STAT5 expression in the ovaries of wild ground squirrels (<em>Citellus dauricus</em> Brandt).

作者信息Qingjing Gao, Wenqian Xie, Wenjing Lu, Yuning Liu, Haolin Zhang, Yingying Han, Qiang Weng
PMID37781865
发布时间2023-10
DOI10.4081/ejh.2023.3825

实验完整度

研究包括组织学、免疫组化、qPCR、激素检测和转录组分析,但缺乏功能验证或机制实验。

主要模型

野生黄鼠卵巢组织(繁殖期与非繁殖期)

重点核对

繁殖期(4月)与非繁殖期(9月)野生雌性黄鼠卵巢样本 卵巢重量测量 免疫组化检测PRL, PRLR, STAT5, p-STAT5的定位与表达 qPCR检测Prl, Prlr, Stat5 mRNA水平 ELISA检测血浆和卵巢PRL浓度

摘要

催乳素(PRL)是一种对正常繁殖至关重要的激素,作为自分泌、旁分泌和内分泌因子发挥作用。本研究旨在检查野生黄鼠在繁殖期和非繁殖期卵巢中PRL、催乳素受体(PRLR)和信号转导及转录激活因子5(STAT5)的免疫定位和表达模式。观察到卵巢重量的显著季节性变化,繁殖期较高,非繁殖期相对较低。PRL、PRLR、STAT5和p-STAT5在繁殖期的颗粒细胞和黄体细胞中均有免疫定位,而在非繁殖期仅在颗粒细胞中发现。与繁殖期相比,繁殖期卵巢组织中Prl、Prlr和Stat5的mRNA表达水平升高。此外,Prl、Prlr和Stat5的平均mRNA水平与卵巢重量呈正相关。繁殖期循环PRL和卵巢PRL浓度均显著升高。此外,卵巢组织的转录组分析揭示了可能与卵巢功能和乳腺发育相关的差异表达基因,包括卵巢卵泡发育、类固醇合成和生殖过程调控。这些发现提示PRL可能通过内分泌、自分泌或旁分泌方式在野生黄鼠卵巢功能的季节性变化中发挥重要的调节作用。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
PRL、PRLR和STAT5在野生黄鼠卵巢中的表达是否随季节变化,并可能参与季节性卵巢功能的调控?
核心机制
PRL可能通过内分泌、自分泌或旁分泌方式,经PRLR/STAT5信号通路调节卵巢功能。
主要证据
繁殖期卵巢中PRL、PRLR、STAT5和p-STAT5的免疫组化染色增强,Prl、Prlr和Stat5的mRNA表达水平升高,循环PRL和卵巢PRL浓度均升高,并与卵巢重量正相关。
研究意义
本研究增进了对PRLR/STAT5信号通路在动物季节性繁殖中作用机制的理解。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

组织学与形态学分析

观察繁殖期和非繁殖期卵巢形态和组织学差异

对卵巢进行H&E染色,观察形态和卵泡分布

2

免疫组化定位PRL、PRLR、STAT5和p-STAT5

定位并比较PRL、PRLR、STAT5和p-STAT5在卵巢中的表达

使用特异性抗体进行免疫组化染色

3

qPCR检测mRNA表达

比较繁殖期和非繁殖期Prl、Prlr、Stat5 mRNA表达水平

提取卵巢RNA,逆转录后实时荧光定量PCR

4

激素浓度测定

测定血浆和卵巢中PRL浓度

使用ELISA试剂盒检测

5

转录组分析

分析繁殖期和非繁殖期卵巢中差异表达基因及功能富集

对卵巢组织进行转录组测序,使用DESeq2分析差异表达基因

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

验证样本或模型特征
验证分子表达变化
验证激素水平

产品清单

实验环节名称品牌货号
催乳素抗体Bioss Biotechnologybs-0508R
催乳素受体抗体Bioss Biotechnologybs-6445R
STAT5抗体Affinity Biosciencesbs-1142R
磷酸化STAT5抗体Bioss BiotechnologyAF3304
TRIzol试剂盒Invitrogen--
Hiffair III第一链cDNA合成试剂盒Yeasen Biotechnology--
Hieff UNICON通用蓝qPCR SYBR Green预混液Yeasen Biotechnology--
ABI PRISM 7500快速实时荧光定量PCR系统Applied Biosystems--
大鼠催乳素ELISA试剂盒Cusabio Biotech Co., Ltd.CSB-E06881r

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物模型
野生雌性黄鼠的捕获季节(4月繁殖期和9月非繁殖期)及数量(每组10只)
阅读提示:见Materials and Methods中的Animals部分
组织学检测
卵巢固定方式(4%多聚甲醛),切片厚度(5 μm)
阅读提示:见Materials and Methods中的Histology部分
免疫组化
一抗类型及稀释度(均为1:200),阴性对照(PBS代替一抗)
阅读提示:见Materials and Methods中的Immunohistochemistry部分及Table 1
qPCR
RNA提取方法、qPCR反应条件(95°C预变性10分钟,40个循环),内参基因(Actb)
阅读提示:见Materials and Methods中的Total RNA extraction和qPCR部分
激素检测
血浆和卵巢组织PRL浓度测定方法,ELISA试剂盒(Rat prolactin ELISA Kit)
阅读提示:见Materials and Methods中的Hormone assay部分
转录组分析
每组样本量(n=3),测序平台(Illumina GAIIx),差异表达基因筛选标准(adjusted p≤0.05,|Log2FoldChange|≥1)
阅读提示:见Materials and Methods中的Transcriptome data analysis部分