组织学与形态学分析
观察繁殖期和非繁殖期卵巢形态和组织学差异
对卵巢进行H&E染色,观察形态和卵泡分布
Seasonal patterns of prolactin, prolactin receptor, and STAT5 expression in the ovaries of wild ground squirrels (<em>Citellus dauricus</em> Brandt).
研究包括组织学、免疫组化、qPCR、激素检测和转录组分析,但缺乏功能验证或机制实验。
野生黄鼠卵巢组织(繁殖期与非繁殖期)
繁殖期(4月)与非繁殖期(9月)野生雌性黄鼠卵巢样本 卵巢重量测量 免疫组化检测PRL, PRLR, STAT5, p-STAT5的定位与表达 qPCR检测Prl, Prlr, Stat5 mRNA水平 ELISA检测血浆和卵巢PRL浓度
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
观察繁殖期和非繁殖期卵巢形态和组织学差异
对卵巢进行H&E染色,观察形态和卵泡分布
定位并比较PRL、PRLR、STAT5和p-STAT5在卵巢中的表达
使用特异性抗体进行免疫组化染色
比较繁殖期和非繁殖期Prl、Prlr、Stat5 mRNA表达水平
提取卵巢RNA,逆转录后实时荧光定量PCR
测定血浆和卵巢中PRL浓度
使用ELISA试剂盒检测
分析繁殖期和非繁殖期卵巢中差异表达基因及功能富集
对卵巢组织进行转录组测序,使用DESeq2分析差异表达基因
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学 | 催乳素抗体 | Bioss Biotechnology | bs-0508R |
| 催乳素受体抗体 | Bioss Biotechnology | bs-6445R | |
| STAT5抗体 | Affinity Biosciences | bs-1142R | |
| 磷酸化STAT5抗体 | Bioss Biotechnology | AF3304 | |
| RNA提取 | TRIzol试剂盒 | Invitrogen | -- |
| cDNA合成 | Hiffair III第一链cDNA合成试剂盒 | Yeasen Biotechnology | -- |
| qPCR | Hieff UNICON通用蓝qPCR SYBR Green预混液 | Yeasen Biotechnology | -- |
| ABI PRISM 7500快速实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | -- | |
| 激素测定 | 大鼠催乳素ELISA试剂盒 | Cusabio Biotech Co., Ltd. | CSB-E06881r |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 野生雌性黄鼠的捕获季节(4月繁殖期和9月非繁殖期)及数量(每组10只) 阅读提示:见Materials and Methods中的Animals部分 |
| 组织学检测 | 卵巢固定方式(4%多聚甲醛),切片厚度(5 μm) 阅读提示:见Materials and Methods中的Histology部分 |
| 免疫组化 | 一抗类型及稀释度(均为1:200),阴性对照(PBS代替一抗) 阅读提示:见Materials and Methods中的Immunohistochemistry部分及Table 1 |
| qPCR | RNA提取方法、qPCR反应条件(95°C预变性10分钟,40个循环),内参基因(Actb) 阅读提示:见Materials and Methods中的Total RNA extraction和qPCR部分 |
| 激素检测 | 血浆和卵巢组织PRL浓度测定方法,ELISA试剂盒(Rat prolactin ELISA Kit) 阅读提示:见Materials and Methods中的Hormone assay部分 |
| 转录组分析 | 每组样本量(n=3),测序平台(Illumina GAIIx),差异表达基因筛选标准(adjusted p≤0.05,|Log2FoldChange|≥1) 阅读提示:见Materials and Methods中的Transcriptome data analysis部分 |