建立小鼠UC模型并评估EA疗效
验证EA对DSS诱导的UC小鼠的改善作用
小鼠分组为Control、DSS、DSS+EA。DSS组和DSS+EA组自由饮用2.5% DSS 7天；DSS+EA组从造模第5天开始每天电针ST36穴位30分钟（2Hz, 0.2mA），共5天。评估体重、DAI评分、结肠长度和组织学评分。
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电针通过靶向CXCL1缓解溃疡性结肠炎：来自转录组的证据与验证
Electroacupuncture alleviates ulcerative colitis by targeting CXCL1: evidence from the transcriptome and validation.
实验完整度
高包含DSS诱导小鼠模型、EA干预、转录组测序、人类数据验证、免疫浸润分析及WB/IF/qPCR等验证，涵盖多层级证据。
主要模型
DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型 人结肠活检样本（GSE38713数据集）
重点核对
DSS浓度2.5%和给药时间7天 电针穴位ST36，频率2Hz，强度0.2mA，持续30分钟，从造模后第5天开始，每天1次，共5天 qRT-PCR验证Cxcl1、Cxcl3、Cxcl5、Cxcl13的mRNA表达 免疫荧光检测F4/80、CD86、Arg1、CD4、IFN-γ的阳性细胞
摘要
背景：我们旨在利用转录组学、生物信息学分析和核心基因验证，确定电针治疗溃疡性结肠炎的核心基因和潜在机制。材料与方法：通过葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎后进行电针治疗。采用体重、疾病活动指数、结肠长度和结肠组织的苏木精-伊红染色评估电针的效果。分析小鼠转录组样本以确定核心基因，并进一步用人类转录组数据库进行验证；使用ImmuCellAI数据库分析核心基因与免疫浸润细胞之间的关系；并使用免疫荧光验证结果。结果：电针可降低疾病活动指数和组织学结肠炎评分，增加体重和结肠长度，并改善溃疡性结肠炎小鼠血清和结肠中局部和全身促炎因子的表达。通过小鼠和人类转录组数据的联合生物信息学分析，鉴定出18个共差异表达基因；Cxcl1是核心基因。电针通过抑制Cxcl1表达影响免疫浸润细胞，并通过影响Th1细胞因子IFN-γ调节巨噬细胞的极化，从而抑制CXCL1的表达。结论：CXCL1是电针的靶点，其与Th1细胞因子IFN-γ相关的潜在免疫机制有关。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 电针治疗溃疡性结肠炎的核心靶基因及其潜在免疫机制是什么？
- 核心机制
- 电针通过抑制Cxcl1表达，影响Th1细胞因子IFN-γ，进而调节巨噬细胞M1/M2极化（抑制M1、促进M2），从而缓解结肠炎症。
- 主要证据
- 小鼠DSS模型、转录组分析联合人类数据鉴定Cxcl1为核心基因；qRT-PCR验证表达；免疫荧光显示EA下调CXCL1、IFN-γ，并促进M2极化。
- 研究意义
- 研究确定了CXCL1为电针治疗UC的关键靶点，并揭示了其与Th1细胞因子IFN-γ相关的免疫机制，为电针治疗UC的机制研究提供了新见解。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
检测炎症因子表达
评估EA对血清和结肠组织中促炎因子的影响
使用ELISA检测血清TNF-α和IFN-γ水平；使用Western blot检测结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ和CXCL1的蛋白表达。
小鼠转录组分析
识别EA调节的差异表达基因和相关通路
对小鼠结肠组织进行ONT转录组测序，筛选Control vs DSS和DSS vs DSS+EA的DEGs，取交集获得mice EA-DEGs，并进行GO和KEGG富集分析。
人类转录组数据分析和整合
验证小鼠发现并鉴定跨物种共同靶基因
从GEO下载人类UC数据集GSE38713，分析UC vs Normal的DEGs，并将人类DEGs与小鼠EA-DEGs进行同源基因整合，得到18个共DEGs，通过PPI网络和cytoHubba确定核心基因Cxcl1。
qRT-PCR验证核心基因
验证CXC家族趋化因子在结肠组织中的mRNA表达
对Cxcl1、Cxcl3、Cxcl5、Cxcl13进行qRT-PCR检测，基于2^-△△Ct方法，以β-actin为内参。
免疫浸润分析
评估UC中免疫细胞浸润情况及其与Cxcl1的相关性
使用ImmuCellAI数据库分析GSE38713中24种免疫细胞的浸润分数，并计算Cxcl1与免疫细胞的相关性。
免疫荧光验证巨噬细胞极化和Th1细胞因子
验证EA对巨噬细胞极化和IFN-γ表达的影响
使用免疫荧光检测结肠组织中M1型巨噬细胞（F4/80+CD86+）、M2型巨噬细胞（F4/80+Arg1+）和Th1细胞因子IFN-γ（CD4+IFN-γ+）的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
验证样本或模型特征
转录组测序与生物信息学分析
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 小鼠模型诱导 | 葡聚糖硫酸钠 | MP Biomedicals | -- |
| HE染色 | HS6数字全切片扫描仪 | Sunny | -- |
| ELISA | TNF-α和IFN-γ ELISA试剂盒 | Elabscience | -- |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Thermo | -- | |
| FuturePAGE™凝胶 | ACE | ET15420GEL | |
| 抗IL6抗体 | Bioss | bs-0782R | |
| 抗IL1β抗体 | Bioss | bs-0812R | |
| 抗TNF-α抗体 | Proteintech | 60291-1-Ig | |
| 抗IFN-γ抗体 | Bioss | bs-0480R | |
| 抗CXCL1抗体 | Proteintech | 12335-1-AP | |
| 抗GAPDH抗体 | Proteintech | 60004-1-Ig | |
| 抗肌动蛋白抗体 | Proteintech | 66009-1-Ig | |
| RNA-seq | 牛津纳米孔技术 | Oxford Nanopore | -- |
| qRT-PCR | MolPure® TRIeasy™ Plus 总RNA提取试剂盒 | Yeasen | -- |
| Hifair®III 第一链cDNA合成SuperMix | Yeasen | -- | |
| Hieff® qPCR SYBR®Green预混液 | Yeasen | -- | |
| Bio-Rad CFX Maestro PCR系统 | Bio-Rad | -- | |
| 免疫荧光 | DAPI | Beyotime Biotechnology | -- |
| 抗F4/80抗体 | Servicebio | GB11027 | |
| 抗CD86抗体 | CST | #91882S | |
| 抗ARG1抗体 | Servicebio | GB11285 | |
| 抗CD4抗体 | Servicebio | GB13064-2 | |
| 免疫荧光成像 | Pannoramic 250FLASH | 3DHISTECH | -- |
| 统计分析 | SPSS软件 | IBM | -- |
| 绘图 | GraphPad Prism | GraphPad | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | C57BL/6J小鼠，SPF级，26±2g；2.5% DSS自由饮用7天 阅读提示：Materials and methods: Experimental animals and groups |
| 电针干预 | 穴位ST36，频率2Hz，强度0.2mA，每次30分钟，从造模第5天开始，每天1次，共5天 阅读提示：Materials and methods: EA intervention |
| 转录组分析 | 每组3只小鼠的结肠组织RNA；DEG筛选阈值|log2FC|>2.5，P<0.01；ONT测序 阅读提示：Materials and methods: Mice transcriptome data collection and processing; Differentially expressed genes screening |
| 免疫浸润分析 | 使用ImmuCellAI数据库分析人类数据集GSE38713中24种免疫细胞浸润；Pearson相关性 阅读提示：Materials and methods: Immune cell infiltration profile; Results: Profile of immune infiltration in UC |
| qRT-PCR验证 | 每组n=6；2^-△△Ct方法，β-actin内参 阅读提示：Materials and methods: Quantitative real-time polymerase chain reaction |
| 免疫荧光验证 | 每组n=3；抗体浓度：anti-F4/80 (1:500), anti-CD86 (1:200), anti-ARG1 (1:200), anti-CD4 (1:200), anti-IFN-γ (1:100) 阅读提示：Materials and methods: Immunofluorescence; Results Figures 7-9 |