假磷酸酶MK-STYX的DUSP结构域与G3BP1相互作用以减少应激颗粒

丝裂原活化蛋白激酶磷酸丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸结合蛋白（MK-STYX）是蛋白酪氨酸磷酸酶家族的双特异性（DUSP）成员。它是一种假磷酸酶，在催化活性特征基序（HCX5R）中缺乏必需的氨基酸组氨酸和半胱氨酸。我们之前报道过MK-STYX与G3BP1 [Ras-GAP（GTP酶激活蛋白）SH3（Src同源3）结构域结合蛋白-1]相互作用并减少应激颗粒（停滞的mRNA）。为了确定MK-STYX如何减少应激颗粒，使用了MK-STYX的截短结构域CH2（细胞分裂周期25磷酸酶同源2）和DUSP。野生型MK-STYX和DUSP结构域显著减少了由亚砷酸钠诱导的应激颗粒，其中G3BP1（应激颗粒成核因子）作为标志物。此外，共表达G3BP1-GFP和mCherry-MK-STYX、mCherry-MK-STYX-CH2、mCherry-MK-STYX-DUSP或mCherry的HEK/293和HeLa细胞显示，在野生型MK-STYX和MK-STYX的DUSP结构域存在下，应激颗粒显著减少。对HeLa细胞中这些动态的进一步表征表明，与野生型MK-STYX及其DUSP结构域相比，CH2结构域增加了细胞内的应激颗粒数量。为了进一步分析G3BP1与MK-STYX结构域的相互作用，进行了免疫共沉淀实验。共表达G3BP1-GFP和mCherry、mCherry-MK-STYX、mCherry-MK-STYX-CH2或mCherry-MK-STYX-DUSP的细胞表明，MK-STYX的DUSP结构域与G3BP1-GFP和内源性G3BP1均相互作用，而MK-STYX的CH2结构域不与G3BP1共免疫沉淀。此外，在野生型MK-STYX或DUSP结构域存在下，G3BP1酪氨酸磷酸化（应激颗粒形成所必需）降低，而在CH2存在下则增加。这些数据突出了MK-STYX如何减少G3BP1诱导的应激颗粒的模型。MK-STYX的DUSP结构域与G3BP1相互作用并负向改变其酪氨酸磷酸化，从而减少应激颗粒的形成。