人类和猕猴脑组织制备
获取用于免疫组化和免疫荧光分析的脑组织样本。
对7例人类和10只猕猴脑组织进行固定、切片,用于后续染色。
Thyroid Hormone Transporters MCT8 and OATP1C1 Are Expressed in Projection Neurons and Interneurons of Basal Ganglia and Motor Thalamus in the Adult Human and Macaque Brains.
包含人类和猕猴脑组织的免疫组化、双重/多重免疫荧光共定位实验,以及多个神经元标志物验证,明确了MCT8和OATP1C1在不同神经元亚群的表达。
人类基底节和运动丘脑组织样本 猕猴基底节和运动丘脑组织样本
人类脑组织来源于7例健康成人,猕猴脑组织来源于10只健康成年猴 MCT8和OATP1C1抗体种类及稀释度(如MCT8抗体IHC 1:700-1:2000) 免疫组化和免疫荧光的抗原修复条件、封闭条件和孵育时间 双重/多重免疫荧光共定位使用的神经元标志物(DRD1、DRD2、PARV、CALB、CALR、nNOS、SOM、ChAT)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取用于免疫组化和免疫荧光分析的脑组织样本。
对7例人类和10只猕猴脑组织进行固定、切片,用于后续染色。
检测MCT8和OATP1C1在不同神经元亚群的表达。
使用特异性抗体进行免疫组化染色和双重/多重免疫荧光共定位。
明确表达MCT8和OATP1C1的神经元具体类型。
使用神经元标志物(DRD1、DRD2、PARV、CALB、CALR、nNOS、SOM、ChAT等)进行双重/多重标记,确定共表达情况。
记录和量化免疫标记结果。
使用荧光显微镜和共聚焦显微镜采集图像,用FIJI软件进行分析处理。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学 | 抗MCT8抗体 | Sigma-Aldrich | HPA003353 |
| 抗OATP1C1抗体(Visser) | 捐赠自Dr. T. Visser | -- | |
| 抗OATP1C1抗体(Bioss) | Bioss | bs-11436R | |
| 抗OATP1C1抗体(Cusabio) | Cusabio | CSB-PA868355LA01HU | |
| 抗OATP1C1抗体(Abcam) | Abcam | ab234729 | |
| 抗OATP1C1抗体(Santa Cruz) | Santa Cruz Biotechnology | sc-398883 | |
| 免疫荧光 | 抗PDGFR-β抗体 | R&D systems | AF385 |
| 抗DRD1抗体 | R&D systems | MAB8276 | |
| 抗DRD2抗体 | R&D systems | MAB9266 | |
| 抗CALB抗体 | Sigma-Aldrich | C9848 | |
| 抗CALR抗体 | Swant | 6B3 | |
| 抗ChAT抗体 | Merck Millipore | AB144P | |
| 抗PARV抗体 | Sigma-Aldrich | P3088 | |
| 抗nNOS抗体 | R&D systems | AF2416 | |
| 抗SOM抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-55565 | |
| 抗TYH抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-25269 | |
| UEA-I凝集素 | -- | -- | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| FluorSave | Merck | 345789 | |
| 针对γ1链C区的二抗 | Aviva Systems Biology | OASB01959 | |
| 免疫组织化学 | 抗生物素-生物素复合物(ABC) | Invitrogen | 32050 |
| DAB | Sigma | D5905 | |
| 图像采集 | Neurolucida软件 | MicroBrightField Bioscience | -- |
| 尼康Eclipse 400显微镜 | Nikon | -- | |
| 蔡司LSM710共聚焦显微镜 | Zeiss | -- | |
| 图像分析 | FIJI软件 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 组织固定与切片 | 固定液类型和固定时间、切片厚度 阅读提示:参见Materials and Methods 4.1和4.2 |
| 免疫组织化学 | 抗体稀释度、抗原修复条件、封闭条件、孵育时间 阅读提示:参见Materials and Methods 4.4 |
| 免疫荧光 | 抗体组合、光漂白预处理、孵育时间 阅读提示:参见Materials and Methods 4.5 |
| 图像采集与分析 | 显微镜型号、软件版本 阅读提示:参见Materials and Methods 4.6 |