建立特应性皮炎(AD)样小鼠模型
通过DNCB诱导产生AD样皮肤症状,用于评估MSC治疗效果。
6周龄雌性BALB/c小鼠背部剃毛,第0、3、6、9天涂抹1% DNCB致敏,第12、15、18、21、24、27天用0.5% DNCB激发,建立AD样模型。
Human umbilical cord mesenchymal stem cell treatment alleviates symptoms in an atopic dermatitis-like mouse model.
包含体外细胞实验和体内动物模型,并通过RNA-seq、ELISA、免疫组化、免疫荧光等多层级验证功能与机制。
BALB/c小鼠DNCB诱导的特应性皮炎模型 人脐带间充质干细胞 小鼠皮肤、脾脏、淋巴结组织样本
MSC注射剂量:每只小鼠2×10^6个MSCs,分4次注射(第13、17、21、25天) MSC注射途径:皮下注射(scMSC组)或皮下联合静脉注射(scivMSC组) DNCB诱导方案:1% DNCB第0、3、6、9天致敏,0.5% DNCB第12、15、18、21、24、27天激发 小鼠分组:每组6只,共4组(对照组、DNCB组、DNCB+scMSC组、DNCB+scivMSC组) 统计方法:单因素或双因素ANOVA,Tukey's或Dunnett's多重比较检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
通过DNCB诱导产生AD样皮肤症状,用于评估MSC治疗效果。
6周龄雌性BALB/c小鼠背部剃毛,第0、3、6、9天涂抹1% DNCB致敏,第12、15、18、21、24、27天用0.5% DNCB激发,建立AD样模型。
评估皮下或皮下联合静脉注射MSC对AD样症状的改善作用。
在第13、17、21、25天,scMSC组皮下注射100μL MSC溶液(含2×10^6个MSCs),scivMSC组皮下注射50μL和尾静脉注射50μL。
评估MSC治疗对AD样皮肤病变的改善效果。
通过皮炎评分、抓挠频率、耳厚度、组织学检查(HE染色、甲苯胺蓝染色)评估皮肤病变、表皮厚度、肥大细胞浸润。
分析MSC治疗对皮肤和免疫器官中免疫细胞浸润的影响。
通过免疫组化检测CD4、CD8、CD1a、CXCR3、CCR3等免疫细胞标志物,通过免疫荧光检测IL-1β表达。
比较各组背部和血液的转录组差异,探讨MSC治疗的分子机制。
第30天收集背部皮肤和血液,提取总RNA,进行RNA测序,并进行GO、KEGG和GSEA分析。
检查MSC治疗对血清IgE水平的影响。
通过ELISA试剂盒检测血清IgE水平。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | 橄榄油 | Sigma | -- |
| ELISA | IgE小鼠未包被ELISA试剂盒 | Invitrogen | 88-50460 |
| 免疫组化 | Ki67抗体 | CST | 12202s |
| CD4抗体 | CST | 25229S | |
| CD8抗体 | CST | 98941S | |
| CD1a抗体 | Proteintech | 17325-1-AP | |
| CXCR3抗体 | Proteintech | 26756-1-AP | |
| CCR3抗体 | Bioss | bs-1167R | |
| 免疫荧光 | IL-1β抗体 | Affinity | AF5103 |
| Alexa Fluor 594偶联二抗驴抗兔IgG | Yeasen | 34312 | |
| 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 | Abcam | ab104139 | |
| OCT包埋剂 | SAKURA | 4583 | |
| Triton X-100 | Solarbio | T8200 | |
| RNA-seq | TRIzol试剂 | Invitrogen | 15596026 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系、性别、年龄、来源;DNCB浓度、致敏和激发时间;溶剂对照 阅读提示:Materials and methods: Induction of AD-like lesions in BALB/c mice and MSC treatment |
| MSC给药 | MSC来源、剂量、给药途径、给药时间、注射体积 阅读提示:Materials and methods: Induction of AD-like lesions in BALB/c mice and MSC treatment |
| 皮炎评分和抓挠频率 | 评分标准、抓挠频率测量时间窗口(1小时,10分钟) 阅读提示:Materials and methods: Dermatitis score and measurements |
| 组织病理学分析 | 组织固定、包埋、染色方法;免疫组化抗体及其稀释度;甲苯胺蓝染色时间 阅读提示:Materials and methods: Histopathological analysis |
| RNA测序 | 样本来源(皮肤、血液);差异基因筛选标准(|fold change|>2,p<0.05);测序公司 阅读提示:Materials and methods: RNA sequencing and statistical analysis |
| 血清IgE水平 | ELISA试剂盒品牌、货号;血清分离条件(离心速度、时间) 阅读提示:Materials and methods: Measurement of serum IgE levels |