输卵管黏膜皱襞中淋巴陷凹的免疫组织化学和扫描电子显微镜确认及其临床意义

Immunohistochemical and Scanning Electron Microscopic Confirmation of the Lymphatic Lacunae in the Uterine Tube Mucosal Folds. What Are the Clinical Implications?

作者信息M Csöbönyeiová, M Klein, M Juríková, C Feitscherová, P Gálfiová, I Varga
PMID36592447
发布时间2022-12-27
DOI--

实验完整度

中

包含人体样本的免疫组化和SEM观察,以及不同绝经状态的比较,但缺乏功能验证或机制验证。

主要模型

输卵管壶腹部和漏斗部伞部组织样本(来自绝经前和绝经后女性)

重点核对

样本来源:25名绝经前和25名绝经后女性的输卵管壶腹部和漏斗部伞部活检样本 固定条件:免疫组化样本在10%福尔马林中固定24小时;SEM样本在3%戊二醛中固定4小时 抗体:抗podoplanin(克隆D2–40)和抗VEGFR-3,按制造商说明书稀释 观察方法:免疫组化使用Leica DM3000LED显微镜,SEM使用ZEISS EVO LS 15

摘要

输卵管在生理性生殖过程中至关重要。其管壁最引人注目的部分是黏膜。除了对其正常功能至关重要的上皮细胞外,结缔组织固有层含有宽大的间隙,其功能、形态和结构尚未阐明。本研究使用了来自25名绝经前(平均年龄48.3岁,σ=3.56)和25名绝经后(平均年龄57.8岁,σ=7.79)女性的活检样本。在两组中,样本取自输卵管两个解剖学上不同的部分——壶腹部和漏斗部及伞部。标本经处理用于扫描电子显微镜(SEM)和免疫组织化学检测podoplanin(克隆D2–40)和VEGFR-3——两种淋巴管内皮细胞标志物。结果显示,绝经前和绝经后女性的标本含有宽大的淋巴间隙,也称为淋巴陷凹。伞部陷凹最可能的功能是在排卵时拾取卵母细胞,这得益于它们能够充满淋巴液,从而起到类似勃起组织的作用。壶腹部陷凹可能负责输卵管液的维持和再循环。这些结果表明,它们对正常生殖至关重要,因为输卵管液动力学与液体成分同样重要。对这一课题的进一步研究非常有必要,因为对输卵管功能的更深入了解具有很大潜力来改进生殖医学方法,例如体外受精(IVF),其在生育结局方面仍远未达到最佳。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
确认输卵管黏膜皱襞中是否存在淋巴陷凹,并研究其形态和分布。
核心机制
淋巴陷凹通过充满淋巴液使伞部膨胀,可能参与卵母细胞拾取;壶腹部陷凹可能参与输卵管液的维持和再循环。
主要证据
免疫组化显示podoplanin和VEGFR-3阳性,SEM显示固有层内衬单层扁平细胞的宽大间隙。
研究意义
为输卵管液动力学在生殖中的重要性提供证据,可能改进IVF技术。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

样本收集与固定

获取并固定来自绝经前和绝经后女性的输卵管组织样本。

从50名女性(25名绝经前和25名绝经后)获取输卵管壶腹部和漏斗部伞部活检样本,并立即固定。

2

免疫组织化学染色

检测淋巴管内皮细胞标志物以确认淋巴陷凹的存在。

使用podoplanin(D2–40)和VEGFR-3抗体进行免疫组化染色,并用EnVision系统显色。

3

扫描电子显微镜观察

观察淋巴陷凹的超微结构。

对样本进行临界点干燥、镀金,然后使用SEM检查。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

检测淋巴管内皮标志物

产品清单

实验环节名称品牌货号
D2-40抗体Agilent DAKOM3619
VEGFR-3抗体BiossBS-2202R
EnVision FLEX显色系统Agilent Technologies--
Leica DM3000LED光学显微镜Leica--
FLEXCAM C3数码相机FLEXCAM--
ZEISS EVO LS 15扫描电子显微镜ZEISS--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
样本收集
样本来源:25名绝经前和25名绝经后女性;获取部位:输卵管壶腹部和漏斗部伞部
阅读提示:Material and Methods: Patients and uterine tube samples
免疫组织化学
固定条件:10%福尔马林24小时;抗原修复:柠檬酸盐缓冲液煮沸;抗体稀释:按制造商说明书;显色系统:EnVision FLEX
阅读提示:Material and Methods: Immunohistochemical staining
扫描电子显微镜
固定:3%戊二醛4小时;后固定:四氧化锇;脱水:梯度乙醇至100%;干燥:临界点干燥;镀膜:15nm金/钯层
阅读提示:Material and Methods: Scanning electron microscopy (SEM)