Protein A-Nanoluciferase融合蛋白用于免疫球蛋白G的通用、灵敏检测

抗体的检测和定量，尤其是免疫球蛋白G（IgG），是ELISA、许多诊断以及基于抗体的药物开发的基石。当前用于抗体检测的先进免疫测定技术需要物种特异性二抗和严格控制生物偶联。偶联效率低会降低测定性能，并因非特异性结合增加临床假阳性的风险。我们开发了一种用于IgG定量的通用、高灵敏度平台，通过将金黄色葡萄球菌蛋白A的IgG-Fc结合Z结构域与超亮生物发光报告分子Nanoluc-荧光素酶（Nluc）融合。我们展示了该融合蛋白在夹心IgG检测免疫测定中的应用，使用表面固定的抗原捕获目标IgG，并以protein A-Nanoluc融合蛋白作为检测器。我们通过在融合蛋白构建体中引入多个Z结构域重复序列来优化平台的灵敏度。使用兔和小鼠抗SARS-CoV-2核蛋白IgG作为模型分析物，我们以两种不同格式进行了ELISA，分别以SARS-CoV-2核蛋白作为捕获抗原或使用多克隆鸡IgY作为捕获抗体。使用标准实验室设备，该平台能够定量低至10 pg/mL（67 fM）的抗体分析物。