信迪利单抗联合化疗对晚期食管鳞状细胞癌患者肿瘤及瘤旁组织中PD-L1、IDO、TIM-3、FOXP3+和CD8表达的影响

Impact of the combination of sintilimab and chemotherapy on the tumor and paratumor PD-L1, IDO, TIM-3, FOXP3+ and CD8 expressions in patients with advanced esophageal squamous cell carcinoma.

作者信息Shifa Zhang, Haibo Cai, Junjun Huang, Gongchao Wang
PMID36288460
发布时间2022-12
DOI10.1111/1759-7714.14683

实验完整度

研究包含患者样本的免疫组化检测及统计分析,但缺乏功能实验和机制验证,属于观察性研究。

主要模型

晚期食管鳞状细胞癌患者肿瘤组织 瘤旁组织 淋巴结组织

重点核对

治疗组患者接受信迪利单抗200mg每3周、顺铂40mg D1-3、白蛋白结合型紫杉醇300mg D1的化疗免疫治疗; 对照组患者未接受术前治疗; 样本分为肿瘤、瘤旁和淋巴结三类组织; 每个指标免疫组化染色后测量积分光密度(IOD)和荧光面积,取3个高倍视野平均值; 统计分析采用Spearman相关、Kruskal-Wallis检验或Friedman秩和检验,p<0.05为显著。

摘要

背景 抗PD-1/PD-L1疗法已在包括晚期食管癌在内的多种肿瘤中广泛用于临床,显示出显著的治疗效果。决定抗PD-1/PD-L1疗法反应的因素众多,包括肿瘤微环境,如CD8+ T细胞和PD-1/PD-L1的表达。我们的研究旨在探讨化学免疫治疗对肿瘤、瘤旁组织中CD8+ T细胞、TIM-3、FOXP3+表达以及肿瘤、瘤旁组织和淋巴结中PD-L1、IDO表达的影响,并分析这些标志物之间的相关性。 方法 共18例患者被分为两个治疗组:治疗组和同期对照组。治疗组共收集38份组织样本、114张玻片(肿瘤、瘤旁、淋巴结),同期对照组共收集37份组织样本、111张玻片(肿瘤、瘤旁、淋巴结)。 结果 化学免疫治疗显著影响肿瘤和瘤旁组织中PD-L1、CD8+、FOXP3+、TIM-3和IDO的表达,但淋巴结中无显著影响。与未接受化学免疫治疗的患者相比,化学免疫治疗后肿瘤和瘤旁组织中CD8+ T细胞、IDO和PD-L1的表达显著降低,而FOXP3+的表达仅在肿瘤组织中显著降低,TIM-3的表达仅在瘤旁组织中显著降低。此外,化学免疫治疗后这些标志物之间的相关性也完全改变。另外,在同期对照组中,N分期与晚期食管鳞状细胞癌中CD8的高表达相关。 结论 本研究为CI治疗对分离的CD8+ T细胞浸润、PD-L1、IDO、FOXP3+和TIM-3表达及其在不同组织中的相互作用的影响提供了新的见解,有助于更好地理解CI治疗对免疫微环境的影响。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
化疗联合免疫治疗(CI)对晚期食管鳞状细胞癌患者肿瘤、瘤旁及淋巴结组织中CD8+ T细胞、PD-L1、IDO、TIM-3和FOXP3+表达的影响及其相关性。
核心机制
文中未明确说明
主要证据
通过免疫组化检测治疗组和对照组患者肿瘤、瘤旁及淋巴结组织中上述标志物的表达,发现CI治疗显著降低肿瘤和瘤旁组织中CD8、PD-L1、IDO的表达,肿瘤组织中FOXP3+降低,瘤旁组织中TIM-3降低,且标志物间相关性发生改变。
研究意义
该研究为理解CI治疗对食管鳞癌肿瘤微环境的影响提供了新见解,有助于更好地理解CI治疗的免疫微环境效应。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

患者纳入与分组

比较接受化疗免疫治疗与未接受治疗的患者在肿瘤微环境标志物上的差异

纳入18例晚期食管鳞状细胞癌患者,分为治疗组(接受信迪利单抗联合化疗)和同期对照组(未接受术前治疗),收集手术切除的肿瘤、瘤旁和淋巴结组织样本。

2

免疫组化染色

检测肿瘤、瘤旁和淋巴结组织中PD-L1、IDO、CD8、TIM-3和FOXP3+的表达

对FFPE组织切片进行免疫组化染色,使用特异性抗体检测各标志物。

3

表达密度测量

定量分析各标志物的表达水平

手动测量各标志物的积分光密度(IOD)和荧光面积,取三个高倍视野的平均值。

4

统计分析

比较不同组间标志物表达差异及标志物间相关性

使用Spearman相关分析标志物间的相关性,使用Kruskal-Wallis检验或Friedman秩和检验比较组间差异,使用单因素和多因素线性回归分析临床变量与CD8表达的关系。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
PD-L1抗体Biossbs-1103R
IDO抗体Proteintech13268-1-AP
CD8抗体Biossbs-10699R
TIM-3抗体Biossbs-10699R
FOXP3+抗体Biossbs-10699R
Dako仪器Dako--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
患者分组与样本收集
治疗组患者接受信迪利单抗200mg每3周、顺铂40mg D1-3、白蛋白结合型紫杉醇300mg D1,共2-3周期;对照组未接受术前治疗;样本包括肿瘤、瘤旁和淋巴结组织。
阅读提示:Methods: Patients and tissue sample collection
免疫组化染色
各标志物抗体稀释度、品牌、货号;染色组织类型(肿瘤/瘤旁/淋巴结);仪器为Dako。
阅读提示:Methods: Immunohistochemistry (IHC) staining
表达定量
每个样本测量三个高倍视野(0.055mm直径)的IOD和面积,取平均值;视野选择基于最高表达密度区域。
阅读提示:Methods: Expression density measurement
统计分析
相关性分析用Spearman相关;组间比较用Kruskal-Wallis或Friedman检验;p<0.05为显著;使用软件SPSS 18.0、R 3.5.3、GraphPad Prism。
阅读提示:Methods: Statistical analysis