细胞培养与材料制备
建立体外细胞模型并制备实验用MTA和BMP-7。
培养人牙髓干细胞(DPSCs)至第3代,制备MTA圆片,并配置不同浓度的重组人BMP-7。
Combined effects of bone morphogenetic protein-7 and mineral trioxide aggregate on the proliferation, migration, and differentiation of human dental pulp stem cells.
含细胞培养、增殖、分化、迁移等体外实验,但缺乏体内模型或临床验证。
人牙髓干细胞(DPSCs,Lonza PT-5025)
细胞系:人牙髓干细胞(DPSCs,Lonza PT-5025),第3代 MTA制备:MTA粉末与蒸馏水按1g:0.3mL混合,制成直径5mm、高2mm的圆片 BMP-7浓度:增殖实验用25、50、100 ng/mL,后续实验选用50 ng/mL 培养条件:37°C、5% CO2,生长或分化培养基,每两天换液 检测指标:WST-1增殖、ALP活性、茜素红染色、RT-qPCR(DMP1、DSPP、nestin)、伤口愈合
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立体外细胞模型并制备实验用MTA和BMP-7。
培养人牙髓干细胞(DPSCs)至第3代,制备MTA圆片,并配置不同浓度的重组人BMP-7。
评估MTA和不同浓度BMP-7单独或联合使用对DPSCs增殖的影响。
DPSCs与MTA和/或不同浓度BMP-7共培养1、3、5天,用WST-1法检测细胞活力。
评估MTA和BMP-7联合使用对DPSCs成牙/成骨分化的影响。
DPSCs在分化培养基中与MTA和/或BMP-7(50 ng/mL)共培养21天,进行一系列分化相关检测。
评估MTA和BMP-7对DPSCs迁移能力的影响。
通过伤口愈合实验,在0、24、48、72小时测量伤口闭合率。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DPSC生长培养基套装 | Lonza | PT-3005 |
| DMEM/F12培养基 | Capricorn | -- | |
| 胎牛血清 | Capricorn | FBS-12B | |
| 青霉素/链霉素 | Capricorn | PS-B | |
| 地塞米松 | Sigma-Aldrich | D4902-100MG | |
| L-抗坏血酸 | Sigma-Aldrich | A4403-100MG | |
| 甘油磷酸盐 | Sigma-Aldrich | G9422-50G | |
| 材料制备 | 三氧化矿物凝聚体 | DENTSPLY Tulsa Dental Specialties | -- |
| 药物处理 | 重组人骨形态发生蛋白-7 | BioVision | 4579-10 |
| 增殖实验 | WST-1试剂 | Roche Applied Science | -- |
| 分化实验 | Transwell小室 | Corning | -- |
| 免疫细胞化学 | 抗DMP1抗体 | Bioss | bs-12359R |
| 抗DSPP抗体 | Bioss | bs-10316R | |
| 抗Nestin抗体 | Bioss | bs-0008R | |
| 山羊抗小鼠FITC | Sigma-Aldrich | F9006 | |
| 驴抗兔Alexa Fluor 568 | Invitrogen | A10042 | |
| DAPI封片剂 | Thermo Fisher Scientific | P36962 | |
| 茜素红染色 | 茜素红S溶液 | Sigma-Aldrich | -- |
| ALP活性测定 | ALP比色法试剂盒 | BioVision | -- |
| RT-qPCR | RNeasy Mini试剂盒 | Qiagen | -- |
| ProtoScript II逆转录酶 | New England Biolabs | -- | |
| QuantiTect SYBR Green PCR试剂盒 | Qiagen | -- | |
| 显微镜检查 | 倒置显微镜 | Leica | DMI4000B |
| 荧光显微镜检查 | 荧光显微镜 | Leica | DMI6B |
| 图像采集 | 相机 | Leica | DFC7000T |
| 光密度测量 | 酶标仪 | Molecular Devices | VersaMax |
| RT-qPCR | 热循环仪 | Qiagen | Rotor Gene-Q |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养 | DPSCs细胞系、代数、培养条件(37°C、5% CO2)、培养基 阅读提示:Methods - Cell culture |
| 材料制备 | MTA与水的比例、模具尺寸、固化时间、灭菌方式;BMP-7浓度 阅读提示:Methods - Preparation of materials |
| 增殖实验 | 细胞密度、培养时间(1、3、5天)、MTA和BMP-7浓度、检测方法 阅读提示:Methods - Proliferation assay |
| 分化实验 | 分化培养基成分、MTA和BMP-7浓度、培养时间(21天)、检测方法 阅读提示:Methods - Odontogenic/osteogenic differentiation, Figure 1 |
| 迁移实验 | 细胞密度、划痕方法、观察时间点(0、24、48、72小时) 阅读提示:Methods - Wound healing |