法舒地尔通过RhoA/ROCK/PI3K/Akt通路改善皮瓣存活和再神经支配的双重功效

法舒地尔被报道对缺血性疾病具有保护作用，并能促进轴突生长。在本研究中，我们旨在评估其在促进皮瓣存活和再神经支配方面的功效。使用92只癌症研究所（ICR）小鼠，分为对照组、法舒地尔组、LY294002组、法舒地尔+LY294002组，分别每天腹腔注射生理盐水、法舒地尔（10 mg/kg）、LY294002（5 mg/kg）和法舒地尔（10 mg/kg）+LY294002（5 mg/kg）。在第0天和第5天，使用激光散斑对比成像（LSCI）评估四组皮瓣蒂部髂腰动脉的血流灌注和直径。第5天，对皮瓣拍照并使用Photoshop CS6计算皮瓣坏死率。此外，从皮瓣中采集组织并分为两部分。一部分进行常规冷冻切片和使用抗CD31抗体的免疫荧光染色，以评估四组的微血管密度。另一部分，使用蛋白质印迹法测定皮瓣内RhoA、ROCK1+2、p-CPI-17、p-MYPT、p-PTEN、p-PI3K、p-Akt和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。此外，在皮瓣手术后第0、7、15和30天，使用抗神经丝蛋白200的抗体进行免疫荧光染色评估皮瓣内的轴突。结果显示，对照组、法舒地尔组、LY294002组、LY294002+法舒地尔组的坏死率分别为(24.4±7.7)%、(5.2±1.6)%、(29.8±4.2)%和(30.9±7.1)%。法舒地尔组皮瓣坏死率显著降低（P<.001）。LSCI和免疫荧光染色表明，法舒地尔能显著扩张蒂部髂腰动脉直径、增加总体血流灌注，并提高皮瓣微血管密度（P<.05），这些效应均可被PI3K抑制剂LY294002消除。第5天，法舒地尔组中p-CPI-17、p-MYPT和p-PTEN的表达下调，而p-PI3K、p-Akt和VEGF上调（P<.001）。至于再神经支配，神经丝蛋白200荧光染色显示，在皮瓣收获后第15天和第30天，仅在法舒地尔组观察到新轴突。可以得出结论，法舒地尔能同时改善皮瓣收获后的存活和轴突生长，这一双重功效是通过抑制RhoA/ROCK通路实现的，进而激活PI3K/AKT通路。