体内AEF活性评估
评估经口给予牛AA淀粉样纤维是否能在小鼠体内诱导AA淀粉样变性的发生。
将小鼠分为三组,分别经口给予含牛AA的肝匀浆、不含牛AA的肝匀浆,以及LPS预处理和皮下LPS给药,观察6周后AA沉积情况。
Species-barrier on the cross-species oral transmission of bovine AA amyloidosis in mice.
研究包含体内和体外实验,分别评估了牛AA的AEF活性、在PP的吸收及向其他器官的转运,并设置了α-syn作为对比材料;但缺乏直接的机制验证和吸收过程的功能阻断实验。
C3H/HeN小鼠模型 ICR小鼠模型 ddY小鼠模型 小鼠Peyer's patches外植体
小鼠品系和数量:C3H/HeN、ICR、ddY,实验1和2各30只C3H/HeN,实验3用ddY和ICR,实验4用ICR 牛AA淀粉样纤维的制备:水提法,浓度2.72 mg/ml,使用前超声处理 口服剂量和次数:实验1中,100 mg肝匀浆(含约14 mg/g bAA)经口给药6次,每次间隔一天 LPS预处理:口服10 mg/kg体重LPS,在每次肝匀浆给药前30分钟 体外实验的孵育时间:bAA或α-syn纤维暴露于PP外植体0.5至6小时
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估经口给予牛AA淀粉样纤维是否能在小鼠体内诱导AA淀粉样变性的发生。
将小鼠分为三组,分别经口给予含牛AA的肝匀浆、不含牛AA的肝匀浆,以及LPS预处理和皮下LPS给药,观察6周后AA沉积情况。
验证经口给予的牛AA是否被Peyer's patches吸收,并观察时间依赖性变化。
将小鼠分为10组,单次经口给予含牛AA的肝匀浆,部分组预先给予LPS,在给药后不同时间点(2至24小时)采集Peyer's patches进行免疫组化检测。
在体外观察牛AA纤维和α-syn纤维与Peyer's patches的相互作用,以比较不同淀粉样蛋白的吸收差异。
将含Peyer's patches的小肠片段两端结扎,向肠腔内注入牛AA纤维、α-syn纤维或PBS,培养后在不同时间点采集组织进行免疫组化检测。
直接向小鼠Peyer's patches注射牛AA纤维,观察其向其他器官的转移情况。
向小鼠Peyer's patches注射含有标记染料的牛AA纤维或PBS,在注射后不同时间点(1天至3周)采集PP、MLN、脾脏、肝脏和肾脏,进行免疫组化检测。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物饲养 | Lab Diet 5001 | Japan SLC | -- |
| 动物麻醉 | 异氟烷 | DS Pharma Animal Health Co., Ltd. | -- |
| 药物处理 | 脂多糖(O111:B4) | Sigma-Aldrich Japan | -- |
| 标记 | 组织标记染料 | Thermo Fisher Scientific K.K. | -- |
| 组织学分析 | 抗人α-突触核蛋白多克隆抗体 | Bioss Antibodies | -- |
| 抗牛SAA1单克隆抗体(克隆:25BF12) | -- | -- | |
| 辣根过氧化物酶标记的抗兔IgG抗体 | Dako | -- | |
| 辣根过氧化物酶标记的抗小鼠IgG抗体 | Dako | -- | |
| 液体DAB底物显色系统 | Dako | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 小鼠品系、性别、年龄、来源及饲养环境 阅读提示:需核对Materials and Methods中的Animals部分 |
| 牛AA淀粉样纤维的制备与给药 | 提取方法、浓度、给药剂量、给药频率、是否使用LPS预处理 阅读提示:需核对Materials and Methods中的Preparation of materials和Experiment 1部分 |
| Peyer's patches吸收检测 | 体内实验中观察时间点和检测方法;体外实验中培养时间、接种剂量和检测方法 阅读提示:需核对Materials and Methods中的Experiment 2和Experiment 3部分,以及图1 |
| Peyer's patches直接接种 | 接种剂量、时间点、标记方法及检测组织范围 阅读提示:需核对Materials and Methods中的Experiment 4部分 |
| 免疫组织化学检测 | 一抗和二抗的来源、稀释倍数、孵育条件;抗原修复等步骤 阅读提示:需核对Materials and Methods中的Histological and immunohistochemical analysis部分 |