脂肪瘤组织来源的小细胞外囊泡在脂肪组织再生中的治疗潜力——一项体外和体内研究

目的：探讨脂肪瘤组织来源的小细胞外囊泡（sEV-LT）的成脂作用，并寻找一种新的无细胞治疗方法用于脂肪组织再生。方法：从人脂肪组织中分离脂肪组织来源的干细胞（ADSCs）和脂肪组织来源的小细胞外囊泡（sEV-AT），从人脂肪瘤组织中分离sEV-LT。通过流式细胞术分析和成脂、成骨分化实验对ADSCs进行鉴定。通过电子显微镜、纳米颗粒追踪和蛋白质印迹法对sEV进行鉴定。分别用sEV-LT和sEV-AT处理ADSCs。使用荧光共聚焦显微镜研究ADSCs是否可以摄取sEV-LT和sEV-AT。通过CCK-8实验、划痕实验和油红O染色实验评估ADSCs的增殖、迁移能力和成脂分化，并通过实时定量PCR（RT-PCR）评估ADSCs中成脂相关基因C/EBP-δ、PPARγ2和脂联素的表达水平。将sEV-LT和sEV-AT移植管皮下植入SD大鼠，在移植后2、4、8和12周对新组织进行定性和组织学评估。随后使用苏木精和伊红（H&E）染色观察并比较新生组织中的脂肪生成和血管生成，而免疫组织化学用于检查第4周时C/EBP-α、PPARγ、脂联素和CD31的表达和分布。结果：体外实验表明，sEV-LT和sEV-AT均可通过内吞作用被ADSCs摄取。划痕实验和CCK-8实验显示，sEV-LT组和sEV-AT组中ADSCs的迁移面积和增殖数量显著高于无sEV组（p < 0.05）。与sEV-AT组相比，sEV-LT组中ADSCs的迁移面积和增殖数量更大（p < 0.05）。油红O染色和RT-PCR实验显示，与无sEV组相比，sEV-LT组和sEV-AT组中ADSCs的脂滴和成脂相关基因PPARγ2和脂联素的mRNA表达水平显著上调（p < 0.05）；然而，C/EBP-δ的表达水平无统计学意义（p > 0.05）。此外，sEV-LT组和sEV-AT组之间的脂滴数量和成脂相关基因无显著差异（p > 0.05）。在第2、4、8和12周，与Matrigel组相比，sEV-LT组和sEV-AT组新生组织中的脂肪细胞面积和毛细血管数量显著增加（p < 0.05）；然而，sEV-LT组和sEV-AT组之间无显著差异（p > 0.05）。在第4周，sEV-LT组和sEV-AT组的新生组织均显示C/EBP-α、PPARγ、脂联素和CD31蛋白表达上调，而Matrigel组的新生组织仅显示CD31蛋白阳性表达。结论：本研究表明，sEV-LT通过促进ADSCs在体外的增殖、迁移和成脂分化，并在体内招募脂肪细胞和促进血管生成，对脂肪组织再生发挥促进作用。sEV-LT可以作为生成脂肪组织的替代无细胞治疗策略，从而在组织工程中提供广阔的应用前景。