热应激下去甲肾上腺素对结肠紧密连接蛋白表达的影响

由人类和动物内部或外部环境变化引起的应激导致肠上皮损伤，其方式与肠屏障功能受损有关。然而，应激激素去甲肾上腺素（NE）在屏障功能损伤中的作用仍知之甚少。在本研究中，采用大鼠热暴露模型观察结肠中紧密连接蛋白Occludin和zonula occludens-1（ZO-1）以及蛋白酶激活受体2（PAR-2）和瞬时受体电位锚蛋白1通道（TRPA1）的变化。使用ELISA试剂盒检测血浆NE水平。使用不同浓度的NE培养人结肠细胞系Caco-2 6和24小时，通过Cell Counting Kit-8测定法检测细胞活力，同时通过蛋白质印迹法和免疫荧光检测Caco-2细胞中Occludin、ZO-1、PAR-2和TRPA1的表达水平，并在大鼠结肠组织中使用免疫组织化学检测。尽管大鼠结肠黏膜没有明显的组织学损伤，但热暴露后紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达水平降低。此外，热暴露增加PAR-2表达。结果发现，与对照组相比，热暴露组TRPA1表达集中在结肠腔表面。给予递增浓度的NE 6小时后，处理不影响细胞活力。此外，应用NE 24小时后，随着NE浓度从10 μM升高至100 μM，细胞活力逐渐增加。然而，当细胞用120和160 μM NE处理时，未观察到活力的显著增加。当应用10 μM NE 6或24小时时，Occludin表达降低。相比之下，60 μM NE在6小时组显著下调Occludin表达，但在24小时组引起不显著的降低。发现10 μM NE处理6小时后ZO-1表达上调，而10 μM NE处理24小时后观察到下调。应用NE 6和24小时后PAR-2蛋白表达增加，但60 μM NE处理后不增加。此外，NE处理不影响TRPA1表达，但在热暴露后大鼠结肠中观察到黏膜腔侧阳性染色增加，似乎集中在腔侧细胞中。总的来说，目前的结果提示紧密连接蛋白Occludin和ZO-1以及PAR-2的表达可以被NE调节，这可能有助于热应激期间观察到的屏障功能损伤。